邢昊-81070728-卢强-鲤鱼白细胞介素-1β基因时空转录分析.doc

本科生毕业论文（设计） 中文题目 鲤鱼白细胞介素-1β基因时空转录分析emporal spatial transcription analysis of the interleukin-1β genomic DNA from common carp 学生姓名 邢昊 班级 2007级3班 学号 学 院 畜牧兽医学院 专 业 动物医学 指导教师 卢 强 职称 教授 目录 中文摘要 II 英文缩写词表 V 前 言 0 第1章 白细胞介素-1研究进展 1 1 白介素-1的一般特征 1 2 白介素-1的生物学功能 2 3 白介素-1受体 3 4 白介素-1受体拮抗剂 4 5 白介素-1与疾病的关系 5 6 结语及展望 6 第2章 鲤鱼白介素-1β基因的差异表达分析 7 1 材料与方法 7 2 结果 12 3 讨论 17 4 小结 19 结 论 20 致谢 21 参考文献 22 中文摘要 鲤鱼白细胞介素-1β基因时空转录分析本研究以荧光mRNA差异显示技术获得的含有鲤鱼IL-1β cDNA部分片段为核酸探针，地高辛标记后，应用核酸杂交法筛选有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库。在获得鲤鱼IL-1β cDNA之后，根据非翻译区和外显子设计引物，应用PCR方法获得了IL-1β基因组DNA。本研究根据IL-1β cDNA设计引物，应用PCR方法，分析了在分离培养的正常白细胞和丝列原刺激的白细胞中该基因不同时间的转录差异情况。结果显示：我们获得的鲤鱼IL-1β cDNA克隆全长bp，含有5?非翻译区和3?非翻译区及3?poly(A)加尾信号（AATAAA），开放阅读框bp，编码个氨基酸的。推测的蛋白序列与斑马鱼、小鼠、牛、人的IL-1β同源性分别为%、%、%、%和%；基因组DNA全长bp，序列分析、系统进化分析该基因进化保守，与物种一样均含有个外显子和个内含子，各外显子碱基数与哺乳动物中相对应的外显子碱基数基本，且内含子外显子剪接位点均遵守GT-AG规则；PCR分析丝裂原刺激白细胞中IL-1β转录增强，尤其是刺激后增强尤为显著，但是随着时间的延长增强幅度下降。提示IL-1β的转录对于不同的诱导物敏感程度不同，也说明细胞受刺激早期发挥免疫作用。 关键词：鲤鱼IL-1β，cDNA 克隆基因组DNA克隆序列分析转录分析 Abstact Temporal spatial transcription analysis of the interleukin-1β genomic DNA from common carp In this study, we obtained the nucleic acid probe with carp IL-1β cDNA fragments of by fluorescence mRNA differential display.After digoxigenin labeled, application of nucleic acid hybridization screening mitogen stimulated peripheral blood leukocyte cDNA library of carp, we acquire carp IL-1β cDNA sequence.According to sequence non-translated region and exon of IL-1β cDNA the pair of primers were designed,IL-1β genomic DNA sequences was obtained by the PCR.Finally,on the basis of the IL-1β cDNA and genomic DNA sequences the pair of primers were designed,by Real time quantitative PCR method, analysis of isolated and cultured in the normal and mitogen stimulation leucocytes in the transcription of the gene difference between the