大麦DNA单限制性酶切选择性扩增多态性技术及其优化.pdf

遗 传HEREDITAS(Beijing)23(5):477一479,2001 技 木 与 力.弓条 大麦DNA单限制性酶切选择性扩增多态性技术及其优化 洪棋斌，裴 炎 (西南农业大学生物技术中心，重庆北磅400712) 摘 要:建立和优化了大麦DNA单限制性酶切选择性扩增多态性技术休系(SADF):分别用限制酶PstI,EcoRl 和Msel酶切大麦基因组DNA，再与各自相应的人工接头连接，使用带三个选择碱基的引物进行选择性扩增。结果 表明:采用分别优化建立的标准PCR扩增检测体系，六个识别碱基的Ps11和EroR1的SADF均能得到丰富称定的 带形，四个识别碱基的Msel不能得到明显潜带。SADF扩增产物片段大小范围为:Pstl一般在200-2000bp，而 EcoRl在200-1000bpt两者在不同大麦品种中均能检测到多态性 可用于不同大麦品种的检测，但Pstl得到的带 型明显优于EcoRl,在大麦中得到的片段具有范围宽、分布均匀、易于观察、多态性高等特点。 关位词:大麦;分子标记;PCR 中圈分类粤:S512.3 文傲标识码:A 文章绷号:0253一9772(2001)06-0477-03 EstablishingandOptimizingSelectiveAmplifiedDNA FragmentsSystemUsingSingleRestrictedEnzymeinBarley HONGQi-bin,PEIYan (BiotechCenterofSouthwestAgrirulturrUniversity,Chongging.400712.China) Abstract;AmethodnamedselectiveamplificationDNAfragments(SADF)usingsinglerestrictiveenzymewasestab- fishedandoptimizedinbarley.ThebarleygenomeDNAwasfirstrestrictedintofragmentsofvariedlengthwith Psal,EcaRIandMselrespectively,thenligatedwithsyntheticadapters.Theligatedsetsoffragmentswereusedas templatesforPCRamplification.Idealamplificationresultscouldbeobtainedwithdifferentamplificationprocedure forPsllandEcoRI.ExceptMseI.bothPsilandEcoRlcouldobtainabundantandreproduciblebands,butSADFof Pstlwasmoresuitableforbarleystudiesbecauseofwider,morerecognizableandpolymorphicdistributionofbands. Keywords:barley;molecularmarker;PCR 扩增片段长度多态性(amplifiedfragmentlengthpoly- 够理想，片段的回收也不如凉脂糖凝胶电泳方便，而且受专 morphisms.AFI.P)是Vos等1995年报道的一种高效DNA 利保护，AFLP试剂盒昂贵 多态性检测方法。它一般采用双限制性酶酶切基因组 根据AFLP原理，采用单限制性醉切墓因组DNA尤其 DNA，加连接头，进行选择性扩增，扩增产物通过放射性同位 是选用识别序列为6个碱基的限制酶醉切，一般可得到平均 素标记和变性聚丙烯酸胺