转化生长因子-β不同亚型对前软骨干细胞增殖分化的影响.pdfVIP

第 42卷第 6期第 659页 华中科技大学学报 (医学版) V01．42 No．6 P．659 2013年 12月 ActaM edUniv SciTechnolHuazhong Dec． 2013 转化生长因子一』3不同亚型对前软骨干细胞 增殖分化的影响 丁 然， 王 庆△， 蔡贤华 广州军区武汉总医院骨科 ，武汉 430070 摘要 ：目的 通过观察转化生长因子 31(TGF一31)3种不同亚型 (p、pz和 p3)对前软骨干细胞(PSCs)的增殖分化及细 胞外基质合成的影响，为构建组织工程学软骨组织寻找理想的细胞 因子 。方法 通过免疫磁珠分选法得到经过筛选和 纯化的PSCs细胞 ，分别用含有浓度为 10ng／mL的 3种亚型的重组 TGF—B培养液对 PSCs进行培养 。PSCs培养后第 0、3、6、9天，采用 MTT法与 Brdu／PI双参法测细胞增殖及 DNA合成水平 ，采用 RTPCR法测定 Col11、Aggrecan基 因 的表达 。采用免疫组化法测定培养 2周后各组细胞 SOX9蛋 白表达情况 。结果 培养 3d后 ，TGF-31组 PSCs的增殖活 性 明显较对照组下降(Pd0．05)，而 TGF一8。、TGF-31。组增殖活性与对照组相 比差异无统计学意义 (P0．05)。6d后 ， 与对照组相 比，TGF一8组细胞增殖活性明显降低 (PO．05)；而 TGF—B。、TGF一31。组则显示 了相反 的结果，增殖活性较对 照组明显增强，且 TGF31。组高于 TGF—G组 (PO．05)。DNA合成呈同样趋势 。RT—PCR分析显示 ，随着时间的延长 ， 与对照组相 比，TGFp、TGFp2、TGF31。组 ColⅡ基 因表达均呈上升趋势；TGF—p 与TGF31。组 Aggrecan的表达亦较对 照组增加 ，但 TGF—pz组 Aggrecan的基 因表达无明显改变 。免疫组化检测结果显示 ，TGFp、TGF13。组的SOX9蛋 白合 成高于对照组(尸o．05)，而 TGF-~。组与对照组相 比差异无统计学意义 (P0．05)。结论 TGF3[能抑制 PSCs增殖 活性，而 TGF—pz和 TGF—p。具有促进 PSCs增殖的作用 ，TGF31与 TGFp3均能促进 PSCs细胞分化 ，而 TGF—p对于分 化的诱导作用不 明显 。 关键词 ：前软骨干细胞 ； 转化生长 因子一8； 增殖 ； 分化 中图分类号 ：R329．2 D0I：10．3870／j．issn2013．06．008 EffectofThreeDifferentTransformingGrowth FactorBetaSubtypeson ProliferationandDifferentiationofPrecartilaginousStem Cells DingRan，WangQing△，CaiXianhua DepartmentofOrthopedics，WuhanGeneralHospitalofGuangzhouM ilitaryCommand，Wuhan430070，China Abstract Objective ToexaminetheeffectofdifferentTGF一8isoforms(TGF131，TGFB2andTGF)ontheprolifera tionanddifferentiationofprecartilaginousstem cells(PSCs)inordertoseekanidea1cytokinefortissueengineeringcartilage construction．M ethods PSCswereobtainedafter isolation and purification bymeansofimmunmagneticactivatedcellsor— ring．Thecellswerethenculturedinth