过表达整合素链接激酶通过NF-kB通路促进脑胶质瘤细胞的上皮间质转化.pdfVIP

第37卷 第2期 中山大学学报(医学科学版) Vo1．37 No．2 2016年 3月 JOURNALOFSUNYAT—SENUNIVERSITY(MEDICALSCIENCES) Mar． 2016 过表达整合素链接激酶通过NF—kB通路促进脑胶质瘤细胞 的上皮问质转化 梁 峰 ，王 冰 ，鲍 龙 ，赵印生 ，张淑芹 (辽宁医学院附属第一医院 1．神经外科 ，2．JL科，辽宁 锦州 121000) 摘 要：【目的】研究过表达整合素链接激酶(ILK)对胶质瘤细胞上皮问质转化(EMT)的渊控作用及初步机制。 【方法】 项 目组前期实验 已经成功构建了重组质粒 pEGFP—C1一ILK，并将其转染给 SHG一44胶质瘤细胞，通过 (；-418筛选 了稳定转 染的细胞株 实验分组如下 ：SHG一44(空白对照组)、pEGFP—Cl(窄载组)，及pEGFP—C1-ILK(稳转组)，先检测各组中ILK的 表达情况(RNA及蛋白质水平)及侵袭能力，再检测过表达 IIK后对 EMT标记物的影响，最后再分别应用 NF—KB通路的特 异性 阻断剂 BAYI1—7028和RNA沉默的方法阻断核 因子 NF—KB通路 ．Westernblot方法检测上皮 间质转化标记物 E— cadherin在阻断前及阻断后的表达情况，初步探讨NF—kB通路存过表达ILK的胶质瘤细胞中对 EMT的调控作用。【结果】稳 转组中ILK明显过表达 ，同时侵袭能力增强 (Transwell小室透膜细胞数在对照组 、空载组和稳转组分别为 ：92，87，229)． Westernblot检测 EMT标记物蛋白的表达 ：稳定转染组 [1lSDail，slug，twist，vimentin的表达较对照组及空载组的表达明显增 高，而E—cadherin的表达则在稳定转染组中明显降低 ．差异有统计学意义 (P0．05)。当分别用NF—kB特异性阻断剂 BAY11—7028及 p65siRNA的方法阻断该通路后，稳定转染组中E—cadhefin蛋白表达明 升高。【结论】胶质瘤叶l过表达ILK 町使侵袭能力增强 ，同时可下调 E—cadherin，上调vimentin及 Snail，Slug，Twist的表达 ，可能通过此机制促进脑胶质瘤细胞的 上皮问质转化 ，NF—kB通路可能参与、调控该进程。 关键词：稳定过表达 ；NF—kB：EMT 中图分类号：R65l 文献标志码 ：A 文章编号：1672—3554(2016)02—0210—07 overexpressionofILK PromotesEM T inGliomaviaNF-KbPathway LIANG Feng，WANGBing，BAO Long，ZHAOYin—sheng，ZHANG Shu—qin (1．DepartmentofNeurosurgery，2．DepartmentofPediatric，TheFirstAffiliatedHospital，LiaoningMedicalUniversity，Liaoning 121000，China) Correspondingto：ZHANG Shu—qin，E—mail163．coin Abstract：【Objective】 Toresearchtheeffectandpreliminarymechanism ofintegrinlinkedkinase(ILK)onepithelial inesenchymaltransition (EMT) inhumangliomacells．M【ethods】 TherecombinantplasmidpEGFP—C1一ILKwassuccessfully constructedandtransfectedintoSHG一44glioinacellsandthestabletransfectedcelllinesw