酪酸对大鼠成骨细胞系中骨唾液酸蛋白转录的作用.pdfVIP

广东医学 2016年6月 第37卷第 l1期 GuangdongMedicalJournalJun．2016，Vo1．37，No．1l · 1631 · 酪酸对大鼠成骨细胞系中骨唾液酸蛋 白 转录的作用 杨立 ，安{；华，沈军 ，小方赖昌。 天津市口腔医院口腔颌面外科(030040)；。山西省人民医院口腔颌面外科 (太原030021)； 日本大学松户齿学部 (千叶2608722) 【摘要】 目的 研究酪酸调节大鼠成骨细胞系(ROSI7／2．8)中骨唾液酸蛋 白(BSP)转录的作用机制。方法 使用能生成BSP的大鼠成骨细胞系(ROS17／2．8)，分为试验组和对照组。试验组首先加入无血清Ot一基本必须 培养基(0【一MEM)配制的(1O～～10 )mol／L浓度梯度的酪酸 12h，确定最优刺激浓度为 10～mol／L，然后使用 10 mol／L的酪酸作用于ROS17／2．8细胞3、6、12h，对照组加入等量不舍酪酸的无血清Or,一MEM。用Northern杂 交试验检测BSPmRNA的表达；用瞬时转染方法检测 BSP启动子的转录活性变化；用凝胶迁移实验验证酪酸对核 蛋白与相关基因区段结合的作用。结果 酪酸作用ROS17／2．8细胞12h后BSPmRNA的表达水平升高。酪酸对 BSP基因启动子转录活性的上调作用主要通过启动子pLUC3(一116～+60)中的纤维母细胞生长因子2响应区段 (FRE)，在凝胶迁移试验 中，酪酸促进 了FRE片段与相应核蛋白的结合。结论 酪酸通过 BSP启动子 中的FRE 片段增强BSP基 因的转录，从而在成骨早期增强成骨细胞活性。 关【键词】 酪酸；成骨；成骨细胞；骨唾液酸蛋白；转录 牙周炎是一种多因素感染性疾病 ，目前研究确认 组织培养皿中加入含有 10％FCS的0【一MEM，细胞培 这种感染与多种牙周致病菌有关 ¨ 。这些细菌代谢 养生长直至完全融合，更换无血清仪一MEM继续培养 后产生的短链脂肪酸 (SCFA)，能够影响细胞增殖、基 12h后 ，试验组首先加入无血清 一MEM配制 的 因表达以及细胞凋亡 。牙周细菌释放的SCFA进 (10～～10 )mol／L浓度梯度的酪酸 12h，确定最优刺 入到周围环境，经 由促炎细胞因子刺激牙龈的炎症反 激浓度为 10一molfL，然后使用 10 mol／L的酪酸连 应 。酪酸是龈下菌斑中的牙周致病菌产生的最主要 续作用ROS17／2．8细胞3、6、12h。对照组加入等量不 的代谢产物，牙周袋内酪酸的浓度与牙周病变的程度 含酪酸的无血清OL—MEM。两组分别用磷酸盐缓冲液 密切相关 。同时，酪酸是有效的组蛋 白去乙酰化酶 (PBS)清洗细胞后 ，胰蛋 白酶消化 5min，再用含有 的抑制剂 j。众所周知，牙槽骨的丧失程度决定了牙 10％FCS的0I—MEM停止消化，收集细胞，15000r／ 周病的严重程度 。骨唾液酸蛋 白(bonesialopro— min离心 1min，细胞一80℃保存。 1．3 Northern杂交试验 用硫氰胍裂解细胞，用苯酚一 tein，BSP)是一种成骨活性的标志性蛋白。BSP基因 氯仿法提取纯化 ROS17／2．8细胞中的总RNA。将25 表达的调控对于成骨细胞分化和骨基质矿化等具有重 g总RNA在 I．2％琼脂糖凝胶中分离并转移至杂交 要意义。近期有许多研究发现酪酸对多种细胞的分化 膜 (HybondN)上。杂交用末端被 [仪一弛P]ATP标记 能够产生影响，低浓度酪酸能够促进成骨细胞的分化 的BSP甘油醛 一3一磷酸脱氢酶 (g|yceraldehyde一3一 和成熟 。此外 ，酪酸可以通过增加 I型胶原蛋 phosphatedehydrogenase