酵母双杂交系统检测SK2与RyR2蛋白的相互作用.pdfVIP

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2017-08-20 发布于天津
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酵母双杂交系统检测SK2与RyR2蛋白的相互作用.pdf

MedicalSciences) Jan． 2011 Vo1．46 No．1 · 45 · Journal0fZhengzhouUniversity( — — 酵母双杂交系统检测 SK2与 RyR2蛋白的相互作用马晶¨，赵国强¨，朱含，袁建党，章茜冲，安玉会 1)郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州 450001 2)郑州大学基础医学院生理学教研室郑州 450001 3)郑卅I 大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室郑州 450001 #通讯作者，女，1957年 10月生，博士，教授，研究方向：心律失常的分子机制，E-mail：qianzhang@ZZU．edu．cn 关键词小电导 ca 激活 K 通道；肌浆网；酵母双杂交；相互作用中图分类号 R3lO．21 摘要目的：探讨小电导 ca。激活 K (SK)通道亚型 SK2通道与肌浆网 (RyR)2蛋白的相互作用。方法：经 PCR扩增及酶切鉴定，构建含有 SK2和 RyR2 目的基因片段的酵母表达载体 pGBKT7一SK2和 pGADT7一RyR2。pG— BKT7．SK2与 pGADT7．RyR2经电转化法转化酵母宿主 AH109，X——Gal／3AT／SD／一Trp-Leu培养鉴定阳性克隆。结果：获得 3个重组质粒 pGBKT7一SK2和 16个重组子 pGADT7一RyR2。酵母双杂交检测结果显示 pGBKT7一SK2与 pGADT7一RyR2可转化酵母 AH109，但无阳性菌落生长。结论：SK2和 RyR2蛋白之间可能无直接相互作用。 IdentificationofinteractionbetweenSK2andRyR2proteinbyyeasttwo— hybrid system MA Jing ’ZHAO Guoqiang ’ZHU Han。 YUAN Jiandang。’ZHANGQian。’，ANYuhui’ ，，，， J)DepartmentofMicrobiologyandImmunology，CollegeofBasicMedicalSciences，ZhengzhouUniversity， Zhengzhou450001 2)DepartmentofPhysiology，CollegeofBasicMedicalSciences，ZhengzhouUniversi— ty，Zhengzhou450001 3)DepartmentofBiochemistryandMolecularBiology，CollegeofBasicMedical Sciences，Zhengzhou University，Zhengzhou450001 Key words small—conductancecalcium—activatedpotassium channel；ryanodinereceptor；yeasttwo—hybrid；interaction Abstract Aim ：Todetecttheinteractionofsmall—conductancecalcium—activatedpotassium channel(SK)2withryan— odinereceptor(RyR)2．Methods：TheyeastexpressiveplasmidpGBKT7vectorscontainingtargetfragmentsofSK2gene andthepGADT7vectorswith thefragmentsofRyR2 genewereindividually constructedbyPCR andrestrictedendonucle— ase．TherecombinantsofpGBK