酵母双杂交系统检测SK2与RyR2蛋白的相互作用.pdfVIP

MedicalSciences) Jan． 2011 Vo1．46 No．1 · 45 · Journal0fZhengzhouUniversity( — — 酵母双杂交系统检测 SK2与 RyR2蛋白的相互作用 马 晶¨，赵国强¨，朱 含 ，袁建党 ，章 茜冲，安玉会 1)郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室 郑州 450001 2)郑州大学基础医学院生理学教研室 郑州 450001 3)郑卅I 大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室 郑州 450001 #通讯作者 ，女 ，1957年 10月生 ，博士 ，教授 ，研究方 向：心律失常的分子机制 ，E-mail：qianzhang@ZZU．edu．cn 关键词 小 电导 ca 激活 K 通道 ；肌浆网；酵母双杂交 ；相互作用 中图分类号 R3lO．21 摘要 目的：探讨小电导 ca。激活 K (SK)通道亚型 SK2通道与肌浆 网 (RyR)2蛋 白的相互作用 。方法：经 PCR扩增及酶切鉴定 ，构建含有 SK2和 RyR2 目的基 因片段 的酵母表达载体 pGBKT7一SK2和 pGADT7一RyR2。pG— BKT7．SK2与 pGADT7．RyR2经 电转化法转化酵母宿主 AH109，X——Gal／3AT／SD／一Trp-Leu培养鉴定 阳性克隆 。结 果 ：获得 3个 重组 质粒 pGBKT7一SK2和 16个重 组 子 pGADT7一RyR2。酵 母 双杂 交检测 结 果显示 pGBKT7一SK2与 pGADT7一RyR2可转化酵母 AH109，但无 阳性菌落生长 。结论 ：SK2和 RyR2蛋 白之 间可能无直接相互作用 。 IdentificationofinteractionbetweenSK2andRyR2proteinbyyeasttwo— hybrid system MA Jing ’ZHAO Guoqiang ’ZHU Han。 YUAN Jiandang。’ZHANGQian。’，ANYuhui’ ， ， ， ， J)DepartmentofMicrobiologyandImmunology，CollegeofBasicMedicalSciences，ZhengzhouUniversity， Zhengzhou450001 2)DepartmentofPhysiology，CollegeofBasicMedicalSciences，ZhengzhouUniversi— ty，Zhengzhou450001 3)DepartmentofBiochemistryandMolecularBiology，CollegeofBasicMedical Sciences，Zhengzhou University，Zhengzhou450001 Key words small—conductancecalcium—activatedpotassium channel；ryanodinereceptor；yeasttwo—hybrid；interaction Abstract Aim ：Todetecttheinteractionofsmall—conductancecalcium—activatedpotassium channel(SK)2withryan— odinereceptor(RyR)2．Methods：TheyeastexpressiveplasmidpGBKT7vectorscontainingtargetfragmentsofSK2gene andthepGADT7vectorswith thefragmentsofRyR2 genewereindividually constructedbyPCR andrestrictedendonucle— ase．TherecombinantsofpGBK