醋柳黄酮对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用.pdfVIP

JournalofZhengzhouUniversity(MedicalSciences) Ju1． 2011 Vo1．46 No．4 · 587 · 等优点作为报告基 因广泛应用于细胞学 的研究 。 有前景的肿瘤靶向性基 因治疗策略。而腺病毒基因 该实验所构建的重组腺病毒载体均 以GFP为报告基 组两端的末端重复序列 ITRs是腺病毒复制必需的 因，其在 293A细胞中的包装情况很容易通过荧光显 顺式作用元件 ，其左侧 ITR是影响外源基因表达 的 微镜来观察 ，并为病毒滴度测定带来很大方便 ，在重 重要原件之一 ，影响了左侧 ITR下游的由hTERT启 组腺病毒感染靶细胞时，也很容易观察其感染效率 。 动子控治的治疗基 因的特异性表达 ，如何避开此类 作者构建的以上 5种携带 GFP报告基 因的重 影响成为亟待解决的问题。 组腺病毒载体 ，以相同的MO1分别感染 CNE、435S、 总之 ，该实验的研究结果证明，在重组腺病毒左 Pancl、U．2OS及 293A细胞 ，感染相 同的时间后 ，发 侧 ITR下游倒转 目的基因的方 向并不能很好地避开 现正向和反向携带 CMV启动子的重组腺病毒在各 ITR的影 响。 细胞 中均表达很强 的荧光 ，正 向比反 向略强。携带 参考文献 hTERT启动子的重组腺病毒在 U．2OS细胞无荧光 表达 (因u．2OS细胞是端粒酶阴性细胞)。而在其 [1]董翠，阴志刚，王纯耀，等．人端粒酶逆转录酶启动子调 他 4种细胞 中均有荧光表达 ，正 向略强于反向。无 控的真核荧光表达载体的构建与表达 [J]．郑州大学学 启动子的重组腺病毒载体 ，只在 293A及 Pancl细胞 报 ：医学版 ，2010，45(3)：448 [2] “C，HirschM，Ca~erP，eta1．A smallregulatoryele— 中表达非常微弱的荧光。而携带启动子的腺病毒载 mentfrom chromosome19 enhancesliver--specificgeneex-· 体在 293A及 Pancl细胞 中表达 的荧光亮度 比其他 pression[J]．GeneTherapy，2008，16(1)：43 3种细胞都较强。以上结果表明，重组腺病毒左侧 [3]EhrhardtD．GFPtechnologyforlivecellimaging[J]．Curr ITR对下游基因的表达影响不会 因下游基因的方向 OpinPlantBiol，2003，6(6)：622 倒转而消失 。并且 ，左侧 ITR也可能有天然启动子 [4]YamamotoM，DavydovaJ，TakayamaK，eta1．Transcription 的功能，使得下游基因在没有启动子 的情况下也能 initiation activityofadenovirusleft--end sequencein adenovi-· 微量表达。 目前 ，已有研究 表 明，腺病毒 ITR有 rusvectorswitheldeleted[J]．JVirol，2003，77(2)：1633 启动子活性 ，并且也有研究 指出，在牛的3型腺病 [5]XingL，TikooSK．E1Apromoterofbovineadenovirus 毒 中，左侧 ITR包含有 E1a的惟一启动子 。该实验