第五章 高效毛细管电泳.pptVIP

一、概述 二、经典电泳分析 三、高效毛细管电泳 High Performance Capillary Electrophoresis 分离过程 高效毛细管电泳的特点 一、高效毛细管电泳(HPCE)基本原理 二、电渗现象与电渗流 Electroosmosis and electroosmotic flow 2.HPCE中的电渗现象与电渗流 3.HPCE中电渗流的大小与方向 HPCE中电渗流的方向 4. HPCE中电渗流的流形 5. HPCE中电渗流的作用 三、HPCE中影响电渗流的因素 3. 电解质溶液性质的影响 4. 温度的影响 5. 添加剂的影响 四、淌度 mobility 五、HPCE中的参数与关系式 3.分离度 六、影响分离效率的因素—区带展宽 3.焦耳热与温度梯度的影响 4.溶质与管壁间的相互作用 5.其他影响因素 一、高效毛细管电泳仪high performance capillary electrophoresis apparatus 仪器2 仪器3 二、仪器流程与主要部件 process and main assembly 1.高压电源 3.缓冲液池 三、毛细管电泳的进样方式 injection method of HPCE 2. 电动进样方式 分离类型 一、毛细管区带电泳capillary zone electrophoresis ，CZE 二、毛细管凝胶电泳 capillary gel electrophoresis ，CGE 三、 胶束电动毛细管色谱（MECC ，MEKC）Micellar electrokinetic capillary chromatography，MEKC 四、毛细管等电聚焦 capillary isoelectric focusing，CIEF 五、毛细管等速电泳 capillary isotachophoresis ，CITP capillary isotachophoresis ，CITP 一、离子分析 阴离子分析 二、药物分析 三、手性化合物分析 四、氨基酸与蛋白质分析 蛋白质分析 五、核酸分析及DNA排序 六、新进展 考试: 电压：0～30kV； 分离柱不涂敷任何固定液； 紫外或激光诱导荧光检测器； （可检测到：10-19～10-21 mol/L） （1）0～30 kV 稳定、连续可调的直流电源； （2）具有恒压、恒流、恒功率输出； （3）电场强度程序控制系统； （4）电压稳定性：0.1%； （5）电源极性易转换； 2. 毛细管柱 （1）材料：石英：各项性能好；玻璃：光学、机械性能差； （2）规格：内径20～75μm，外径350～400μm；长度=1m 化学惰性，机械稳定性好； 4. 检测器 要求：具有极高灵敏度，可柱端检测； 检测器、数据采集与计算机数据处理一体化； 类型 检测限/mol 特点 紫外-可见 10-13～10-15 加二极管阵列，光谱信息 荧光 10-15～10-17 灵敏度高，样品需衍生 激光诱导荧光 10-18～10-20 灵敏度极高，样品需衍生 电导 10-18～10-19 离子灵敏，需专用的装置； 进样量：毛细管长度的1%-2%；纳升级、非常小； 1. 流体力学进样方式 （1）进样端加压 （2）出口端抽真空 （3）虹吸进样 毛细管一端插入样品瓶，加电压； 进样不均：电歧视现象，淌度大的离子比淌度大的进样量大； 离子丢失：淌度大且与电渗流方向相反的离子可能进不去； 特别适合黏度大的试样； 3. 扩散进样 试样通过扩散作用进入分离柱端口处。 第四节高效毛细管电泳分离模式 八种分离类型，介绍常用的几种； 根据试样性质不同，采用不同的分离类型； 每种机理的选择性不同； 带电粒子的迁移速度=电泳和电渗流速度的矢量和。 正离子：两种效应的运动方向一致，在负极最先流出； 中性粒子：无电泳现象，受电渗流影响，在阳离子后流出； 阴离子：两种效应的运动方向相反；ν电渗流 ν电泳时,阴离子在负极最后流出,在这种情况下,不但可以按类分离,同种类离子由于差速迁移被相互分离。 最基本、应用广的分离模式； 将聚丙烯酰胺等在毛细管柱内交联生成凝胶。 其具有多孔性，类似分子筛的作用，试样分子按大小分离。能够有效减小组分扩散，所得峰型尖锐，分离效率高。 蛋白质、DNA等的电荷/质量比与分子大小无关，CZE模式很难分离，采用CGE能获得良好分离，DAN排序的重要手段。