BeadXpress操作流程(中文).docVIP

Make Single-Use DNA (SUD) Plate 处理时间：1小时 孵育时间：30分钟 目的：参考VeraCode Assay Guide对样本DNA进行定量，充分活化用于goldengate array的样本DNA。 所需试剂： 准备工作： 预热加热板至95°C。 打开和预热塑料薄膜加热封口机。15min 将MS1试剂从冰箱取出，放于室温解冻，漩涡震荡充分混匀后，导入一次性加样槽中。 用TE稀释、溶解DNA，使其浓度达到50ng/ul。 用SUD条形码标签标记一块新的0.2ml96孔板。 在sample sheet相应的列输入每一个加样孔所对应Sample_name,Sample_plate。 实验步骤： 在SUD板每孔中加入5ul MS1试剂。 在SUD板每孔中加入5ul DNA样本。用8道移液排枪，每列更换枪头。 在塑料薄膜加热封口机上用热封膜（heat-sealing foil sheets）热封SUD板（3秒）。 250xg离心1min。 将SUD板牢牢固定在漩涡器上，2300rpm漩涡20秒。 250xg离心1分钟。 （离心一定要到250xg，以防95°C孵育加样孔变干） 将SUD板放在预热好的95°C加热板上，盖紧盖子以防蒸发样本。 95°C孵育30min。 （警告：不允许孵育超过30min） 250xg离心1min，离下粘在壁上的液体。 如果接下来做Make ASE，理科将加热板温度设置在70°C。 Precipitate SUD Plate 处理时间：45分钟 干燥时间：15分钟 目的：沉淀已活化的DNA及去除过多的MS1试剂。 所需试剂： 准备工作： 将1ml PS1试剂倒入一次性加样槽中。 将2ml 异丙醇倒入另一个一次性加样槽中。 实验步骤： 小心撕掉热SUD板上的热封膜，注意防止孔内容物溅出。 向SUD板每孔中加入5ul PS1试剂。 用普通白膜（clear adhesive film）封SUD板。 250xg离心1min。 2300rpm漩涡20秒，使液体呈均一蓝色。 去除封口膜，向SUD板每孔中加入15ul 异丙醇。 用普通白膜封SUD板。 1600rpm漩涡20秒，使液体呈均一蓝色。 3000xg离心20min。确定在SUD板每孔管底都可见到略带蓝色的沉淀物，标明DNA已沉淀下来。 （若没有，则再次离心10min。） 去除封口膜，翻转SUD板慢慢倒出上清液，并将板倒放在吸水纸以去除剩余的上清液。 倒置SUD板于吸水纸上，8xg倒甩1min。 （不要超过8xg，以免样品丢失。） 取出SUD板，口向上室温干燥15min。 Resuspend SUD Plate 处理时间：10分钟 目的：溶解沉淀后的活化DNA 所需试剂： 准备工作： 将1.2ml RS1试剂倒入一次性加样槽中。 实验步骤： 向SUD板每孔中加入RS1试剂10ul。 用普通白膜封SUD板。 250xg离心1分钟。 2300rpm漩涡1分钟，使蓝色沉淀完全溶解。 250xg离心片刻。 如果不想继续实验可以把溶解后的DNA做以下处理： 热封SUD板，4°C过夜 若长期储存活化的DNA，可放置-20°C一个月，但用时应该完全解冻和充分混匀。 Make Allele-Specific Extension (ASE) Plate 处理时间：20分钟 孵育时间：2~16小时 目的：将活化的DNA与引物、杂交试剂、磁珠混合放入ASE板，经过退火每条目的序列的特异性引物与活化的DNA结合，同时将活化的DNA固定在磁珠上。 所需试剂： 准备工作： 将加热板预热至70°C并保持温度恒定。 打开和预热热封口机。15min 将OPA试剂从冰箱取出，放于室温解冻，若OPA试剂结冰，应完全解冻、漩涡混匀，250xg离心后方可使用。取1.2ml倒入加样槽。 将OB1试剂从冰箱取出，放于室温解冻，漩涡OB1管，使液体充分混匀，并将管上下颠倒让磁珠充分悬浮于液体中，不要离心OB1试剂。倒入另一个加样槽。 用ASE条形码标签标记一块新的0.2ml 96孔板。 实验步骤： SUD板250xg离心1min。 向ASE板每孔加入10ul的OPA试剂。 向ASE板每孔加入30ul的OB1试剂。 小心撕掉SUD板封口膜，注意防止孔内容物溅出。 从SUD板中取10ul活化的DNA至ASE板的相应位置。 用热封膜热封ASE板（3秒）。 ASE板250xg离心1min。 1600rpm漩涡1min，使磁珠完全悬浮。 将ASE板放在预热好的70°C加热板上，盖紧盖子以防蒸发。 立刻将加热板温度设置在30°C。 将ASE板在加热板上孵育直至其温度下降到30°C，这一降温过程大概需要2小时。加热板温度降到30°C后，ASE板可以在其上继续孵育16小时。 Add Master M