化学核酸酶.docVIP

一、化学核酸酶的合成途径 随着人类基因组计划的完成和人类癌症基因组计划的启动和实施有机化学工作者面临新的机遇和挑战。如何设计合成特定结构的有机化合物与核酸作用在基因水平上干扰、调控细胞增殖信号传递或者定点或定位切除变异基因或其部分变异碱基序列对治疗恶性肿瘤、心血管等重大疾病具有重要意义。[1] 近年来有机小分子与核酸的相互作用、核酸定点定位切割的研究取得了许多重要进展已成为有机化学前沿研究领域之一。定点或定位切割核酸的切割剂的结构包括三个部分：能识别核酸某些序列或某个部位的识别部分能裂解核酸的切割部分连接识别部分和切割部分的连接链。对于切割部分来说文献报道的切割试剂多数是过渡金属配合物切割反应机理一般属于氧化-还原体系的自由基机理糖环或碱基被破坏 自由基易扩散因此限制了在药物开发和分子生物学中的应用。因此迫切需要优秀的基因组编辑工具克服这些缺点。近年来发展起来的人工核酸酶( engineered nucleases，EN) 技术为此带来了新的曙光，使研究者能够对不同物种和细胞中的几乎所有基因进行编辑。[2] 化学核酸酶在如下几方面具有极大的应用价值。 (1)作为DNA构象变化的探针； (2)在亲和断裂分析中作为DNA一蛋白质等相互作用表征的足迹试剂； (3)用于基因组和染色体作图和测序； (4)选择性控制基因表达和调控基因生物活性，发展新型基因表达阻断试剂用于治疗基因无序； (5)开发新型疾病诊断，成像试剂以及设计特效药物治疗等。 目前研究得比较多的化学核酸酶主要包括邻菲咯琳类的铜配合物，锗、钉、钻等的八面体配合物，卟啉、铁—EDTA，铀酰盐，大环镍和稀土配合物等。将这些配合物与其它DNA结合试剂，如多肽、DNA结合蛋白质或寡聚脱氧核昔酸等连结起来，以后者为载体，可以大大提高其识别和裂解DNA的特异性和效率。 有文献指出，图1所示的多吡啶铜配合物能够有效抑制肿瘤细胞的生长，该配合物可能是通过线粒体通路诱导细胞凋亡，从而抑制肿瘤细胞生长。 图1 方法一：（化学合成技术） 上文提到的1，10-菲咯啉-铜[(OP)2-Cu]配合物的合成方法如下所示： 取0.2 mmol CuCl2·2H2O溶于水中；取 2-(4-乙氧苯基)咪唑[4，5-f][1，10]菲咯啉(0.4mmol溶于20 mL甲醇中，搅拌至完全溶解。在搅拌下，将CuCl2·2H2O水溶液逐滴加入到配体的乙醇溶液中，室温搅拌4 h后，立即有绿色沉淀生成。抽滤用水、乙醇洗涤数次。干燥得粗产品。再用甲醇-乙醇重结晶，得绿色产物。[4] 1，10-菲咯啉-铜[(OP)2-Cu]配合物实际上是1，10-菲咯啉的衍生物，并且经过查阅相关文献发现，大多数具有生物活性的化学核酸酶都是1，10-菲咯啉5，6位衍生物，这些1，10-菲咯啉5，6位衍生物的合成具有共性，其合成办法如下： 1，10-菲咯啉的56位衍生为酮，胺基，甲基等其他官能团。1990年，Yamada、Nakamura等人报道用 110-菲咯啉在浓硫酸和浓硝酸和溴化钠的作用下合成110-菲咯啉-56-二酮，产率在 50%。这个反应溴化钠的用量对反应的收率有很大影响。后来Francesco Ferretti、Fabio Ragaini等人对合成工艺进行了改进，仍然采用110-菲咯啉为原料，用浓硫酸和浓硝酸，采用 3 倍的溴化钠的作用下，合成了110-菲咯啉-56-二酮，收率提高到了80%。 郑人华等人在合成 110-菲咯啉-56-二酮之后，进一步衍生，经肟化、还原两步反应得到 56-二氨基-110-菲咯啉，总收率为65%左右。 图3 方法二：（3D打印技术） 随着近年来数字建模技术、机电控制技术、信息技术、材料科学与化学等诸多前沿科技的快速发展，三维打印成了当今最热门的研究方向之一，并被称为可能掀起新一次的工业革命，其应用领域也随着技术的进步而不断扩展。打印结合生物工程技术即生物印刷技术，在生物医药领域有广泛的应用前景。刚起步的生物印刷电子材料技术是将碳纳米管、石墨烯、导电高分子或水凝胶等具有电活性的材料，用印刷方法构建生物相容并有电刺激响应的和细胞培养和组织工程智能支架。适于进行生物印刷的导电材料及支架材料是研究工作的核心内容。[6] 近年来，配合物在光、电、磁、催化、药物缓释、光电转换、气体存储和分离等应用领域表现出了优良的性能，逐步成为一类新型的功能材料。[7] 并且有文献指出，利用纳米喷墨打印技术，成功在打印纸表面形成空间位置可控的镧系金属配合物（LCC）单晶。同时喷墨打印技术可以精确控制镧系金属配合（LCC）单晶的生长位置（示意图如图4所示）。这说明可以通过3D打印技术来合成配合物，因此理论上也说明了可以通过3D打印技术合成化学核酸酶。[8]