试验一蛋白质的沉淀反应.docVIP

实验一 蛋白质的沉淀反应 一、实验目的 通过实验加深对蛋白质亲水胶体两个稳定因素的认识。区分可逆的盐析沉淀和不可逆沉淀作用。 二、试剂与器材 （一）试剂 1. 蛋白质溶液：取10ml蛋清，用蒸馏水稀释至100ml，搅拌均匀后，用纱布过滤。 2. 饱和硫酸铵溶液 3. 硫酸铵粉末 4. 2%硝酸银溶液 5. 0.5%醋酸铅溶液 6. 1%硫酸铜溶液 7. 0.1%醋酸溶液 8. 10%醋酸溶液 9. 饱和氯化钠溶液 10. 10%氢氧化钠溶液 11. 1%醋酸溶液 12. 饱和苦味酸溶液 13. 0.01%氢氧化钠溶液 （二）器材 试管、试管架、滴管、玻璃棒、量筒、水浴锅 三、操作步骤 （一）蛋白质的分段盐析的可逆沉淀反应 1.取一支试管，加入浓蛋白质溶液2ml、饱和硫酸铵溶液2ml，混匀，静置，观察结果。 2.将试管内容物过滤（或取上清液）置另一支试管中，加硫酸铵粉末至饱和，观察析出的清蛋白，等沉淀析出后向试管中加入水，看沉淀是否重新溶解。 （二）蛋白质的不可逆沉淀 1.重金属沉淀蛋白质 取3支试管，编号后按下表加入各种试剂，观察沉淀生成的颜色和量。 管号 试剂（滴） 蛋白质（ml）0.01%氢氧化钠2%硝酸银0.5%醋酸铅1%硫酸铜 1 2 3 1 1 1 1 1 1 1 1 1 现象 2.生物碱试剂沉淀蛋白质 取1支试管，加入蛋白质溶液2ml及1% 醋酸4~5滴。向管中加入饱和苦味酸溶液数滴，观察结果。 3.加热沉淀蛋白质 （1）取5支试管，编号后按下表加入各种试剂（试剂量为：滴）。将各管混匀，观察记录各管溶液情况。 （2）将上列各管放入沸水中加热10分钟，注意观察比较各管的沉淀情况。 试剂 管号 1 2 3 4 5 蛋白质溶液 10 10 10 10 10 0.1%醋酸 5 饱和NaCl 2 10%NaOH 2 蒸馏水 7 2 2 10%醋酸 5 现象 加热后现象 四、结果分析与讨论 实验二 酶的性质 一、实验目的： 1.学会酶的制备 2.验证酶的专一性 二、试剂与器材 （一）试剂 1. 1%淀粉溶液 2. 1%蔗糖溶液 3. 2%过氧化氢 4. 还原性铁粉、 5. PH6.8的缓冲溶液 取0.2mol/L Na2HPO4溶液772 mL，0.1 mol/L柠檬酸溶液228 mL，混合后即成。 6. 班氏试剂 取柠檬酸钠173g和无水碳酸钠100g，溶于700 mL热蒸馏水中，冷却，慢慢倾入17.3% CuSO4溶液100mL（溶解17 gCuSO4.5H2O于100mL水中），边加边摇，加蒸馏水至1000 mL （二）材料 自制唾液、发芽马铃薯 （三）器材 试管、恒温水浴锅、沸水浴锅、烧杯 三、操作步骤 （一）酶的高度的催化效率 1.将发芽的马铃薯切成小块，分一半在沸水浴中煮沸几分钟。 2.取3支试管编号，按下表操作 管序 H2O2 （ml） 生马铃薯 熟马铃薯 铁粉 现象 1 3 若干块 2 3 若干块 3 3 1小匙 3.观察各管中产生气泡的多少，并解释原因。 （二）酶的高度的特异性 1.唾液淀粉酶的制备 漱口后收入唾液于小烧杯，加10~15ml蒸馏水。 2.煮沸唾液制备 取上述稀释唾液约5ml，在酒精灯上煮沸，冷却备用。 3.取试管3支，按下表操作 管序 缓冲液 淀粉液 蔗糖溶液 稀释唾液 煮沸唾液 现象 1 20滴 10滴 / 4滴 / 2 20滴 10滴 / / 4滴 3 20滴 / 10滴 4滴 / 4.各管摇匀，置37℃水浴保温10分钟左右，取出各管，加班氏试剂20滴，置沸水浴，直至发现变色为止（10分钟左右），比较各管变色情况。 四、实验结果分析与讨论 实验三 蛋白质等电点的测定 一、实验目的 1.学习蛋白质等电点的测定方法 二、实验原理 蛋白质分子中含有游离氨基和羧基，因此，它是一种两性