试验培养基制备与消毒灭菌.DOC

实验一、培养基制备与消毒灭菌 一、培养基：满足微生物生长的营养需要，人工配制的混合营养基质。 用途：用于微生物的分离、培养、增殖、保藏及鉴定。 牛肉膏蛋白胨培养基（用于腐生细菌的培养） 马铃薯糖培养基（常用于培养真菌） 高氏一号培养基（用于培养放线菌） 二、培养基配制原则 1）根据营养不同配制不同培养基；2）注意各种营养物质的浓度及配比；3）调节适宜的pH值；4）考虑加生长因子；5）培养基应物美价廉；6）灭菌处理 三、培养基分类 1、根据化学组成分类 (1)天然培养基 完全用天然物质或其浸出汁配制。成分不确定。 如肉汁、豆芽汁、牛乳、土豆汁是天然营养原料。酸奶、饮料酒、腐乳、酱类的发酵生产。 优点：配制方便，成本较低，营养丰富。生产上用 缺点：成分不确定。 （2）合成培养基 全由化学成分已知的物质配制的培养基。成分确定。 如：高氏培养基、察氏培养基 优点：成分确定，重复性强，宜于科学研究 如菌种选育，遗传分析。实验室用。 缺点：费用较高。 （3）半合成培养基 由部分天然物质和一些成份已知的化学药品配制而成。 如：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。 优点：营养成分更全面、均衡 实验室、发酵业用得最多。 2、根据物理状态分类 （1）固体培养基 概念：在液体培养基中加入凝固剂——琼脂、明胶、硅胶等。常用的是琼脂（洋菜）。琼脂加入量1.5～2.0％。 琼脂的特性：1、成分为多缩半乳糖2、绝大多数微生物不能利用3、融化温度96℃ ，凝固温度45℃ 4、对微生物无毒性 固体培养基作用：培养菌落进行分离、鉴定、计数、保藏 （2）半固体培养基 加入凝固剂。琼脂加入量0.2～0.5% 作用：观察细菌的运动状况。 （3）液体培养基 不加凝固剂 用于发酵业。液体培养。 3、按用途差异分类 （1）基础培养基 概念：含有微生物生长繁殖所需的基本营养物质。 用于普通微生物培养。 细菌通用培养基——牛肉膏蛋白胨培养基。 真菌通用培养基——马铃薯蔗糖培养基。 （2）加富培养基 在普通培养基中加入某些特殊物质或某些生长素，只适于一种或一类微生物的生长。 特点：某种微生物富集逐渐淘汰其它各种微生物。 （3）选择培养基 根据培养微生物的生理特性配制。可促进某种微生物生长，抑制某类微生物生长。 如：加青霉素的培养基，分离霉菌和酵母菌。 加1%酚——分离放线菌 （4）鉴别培养基 概念：用以区别不同微生物种类的培养基。 特点：●确保所培养的微生物有丰富的营养条件。 ●显示微生物的某些形态构造或生理代谢上的特点。 如：伊红－美兰培养基区分大肠杆菌和产气肠杆菌。 （5）活体培养基 用某些活的动植物体或离体的生活组织细胞作培养基。 病毒培养。 四、灭菌 消毒：应用理化方法杀灭部分微生物（主要是病原微生物）。 灭菌：应用理化方法杀灭物体上所有微生物。 一）、加热高温灭菌 1.干热灭菌 ▲火焰烧灼灭菌 ▲热空气灭菌 2.湿热灭菌 ▲常压蒸汽灭菌 ▲高压蒸汽灭菌 ▲煮沸法灭菌 ▲超高温灭菌 二）、紫外线灭菌 三）、过滤灭菌 四）、化学药剂的消毒与灭菌 1.高温灭菌：利用高温使菌体蛋白和核酸变性而失去活力以达到杀菌的目的。 2.紫外线灭菌：诱发菌体核酸结构变异，及使空气中氧电离、水氧化而产生杀菌化学物质以杀灭杂菌。 3.过滤除菌：将处理的含菌液体或气体通过细菌过滤器，使杂菌被机械截留从而达到除菌。 4.化学药剂的消毒和灭菌：杀菌剂（破坏微生物的代谢机能并有致死作用）；消毒剂；防腐剂（抑制微生物的生长繁殖）。 干燥热空气箱灭菌 用法：160-170℃,2小时（利用热空气灭菌 ) 特点：由于空气传热穿透力差，菌体在脱水状态下不易杀死。所以温度高、时间长。 高压蒸汽灭菌法:利用水的沸点随水蒸气压力的增加而上升，提高温度以达到高温灭菌目的方法。 a 方法： 一般121℃（1kg/cm2或15磅/英寸2） 20min-30min。 b 适用：耐高温物品如培养基，无菌水，培养皿。 c 注意事项： 灭菌开始排净冷空气；灭菌终了，缓慢降压； 灭菌结束，趁热取出物品。 干热灭菌的操作 包扎。 装箱（物品不可与灭菌箱内壁接触，且不可摆放过挤） 灭菌（启动开关，并打开排气孔，待温度升至80℃-100℃关闭排气孔，继续升温至160℃-170 ℃计时，恒温2小时） 降温，取物（关闭电源，自然降温到60度开箱取物） 高压蒸汽灭菌的操作 灭菌前准备（在锅内加适量水）。 装放物品（不要过挤，且容器口端不要与物品接触） 加热放气（打开放气阀，待有大量水汽排出，维持3—5分钟，锅内空气排尽，关上放气阀） 升温保压（温度，压力升至灭菌所需时计时，压力1.05Kg/cm2,121.3 ℃ ，20—30分钟） 出锅