植物细胞培养与次生产物生产4学时.PDF

第六章 植物细胞培养与次生产物生产 （4 学时） 教学目的与要求： 深入了解植物细胞在离体条件下的生长特性，掌握植物细胞悬浮系的建立以及种细 胞的筛选方法。 第一节、悬浮培养(suspension culture) 悬浮培养是指将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基中进行培养增殖的技术。 Plants Cell suspension Artificial seeds Isolation protoplasts Mutation select Secondary products 悬浮培养与固体培养比较有三个优点：一是增加培养细胞与培养液的接触面，改善 营养供应；二是在振荡条件下可避免细胞代谢产生的有害物质在局部积累而对细胞自身 产生毒害；三是振荡培养可以适当改善气体的交换。 一、愈伤组织的诱导与起始培养物的建立  选择适宜的外植体：幼胚、胚轴、子叶是最常使用的外植体。  选择适宜的培养基：较高浓度激素浓度；必要的附加物质。  愈伤组织的要求：松散性好、增殖快、再生能力强 二、悬浮系的建立与继代培养 1 callus 10ml medium/1g 150~250ml flask 120rpm culture transfer 1time/3d centrifuge isolation 80rpm subculture 一个成功的悬浮细胞培养体系必须满足三个条件：  悬浮培养物分散性良好，细胞团较小，一般在30～50 个细胞以下，在实际培 养中很少有完全由单细胞组成的植物细胞悬浮系。  均一性好，细胞形状和细胞团大小大致相同。悬浮系外观为大小均一的小颗粒， 培养基清澈透亮，细胞色泽呈鲜艳的乳白或淡黄色。  细胞生长迅速，悬浮细胞的生长量一般2～3 天甚至更短时间便可增加一倍。 三．悬浮细胞的生长动态 2 影响悬浮细胞生长的因素：  起始愈伤组织的质量  接种细胞密度  培养条件：方式、温度、  继代周期 四、悬浮培养细胞的同步化 细胞同步化是指同一悬浮培养体系的所有细胞都同时通过细胞周期的某一特定时 期。  植物细胞在悬浮培养中的游离性较差，容易团聚并进入不同程度的分化状态，因 此，要达到完全同步化对于植物细胞培养来讲是十分困难的。  也正是因为同一培养体系的植物细胞通常并不能处于同一细胞周期，这种差异使 悬浮细胞的分裂、代谢以及生理生化状态等更趋复杂化。  通过一定的理化措施可以使同一体系中的细胞达到相对同步化。 细胞同步化的常用方法：  饥饿法：在一个培养体系中，如果细胞生长的基本成分丧失，则导致细胞因饥饿 而分裂受阻，从而停留在某一分裂时期，当在培养基中加入所缺乏的成分或者将 饥饿细胞转入完整培养基中继代培养时，则细胞分裂又可重新恢复。  抑制剂法：通过一些DNA 合成抑制剂处理细胞，使细胞滞留在DNA 合成前期， 当解除抑制后，即可获得处于同一细胞周期－G1 期的同步化细胞。  分选法：通过细胞体积大小分级将处于相同周期的细胞进行分选，将同一周期的 细胞继代培养于同一体系中，使相同培养体系中的细胞具有较好的一致性。  低温处理：冷处理也可以提高培养体系中细胞同步化的程度。Okamura 等曾采用 此途径使胡萝卜悬浮细胞较好的同步化。梅兴国等（2001 ）采用6 ℃低温处理 红豆杉细胞也获