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中国试剂网 3.11.5.32 组织石蜡包埋和切片技术 包埋剂 embedding agent 在制作切片或超薄切片时，由于组织是柔软的，或局部的软硬不均，这样制 作厚薄均匀的切片是困难的。所以有必要用一定物质浸透组织内部，整个组织一 样硬化，以利于切成薄片，这种物质叫做包埋剂。一股用光学显微镜观察的切片， 用石蜡、火棉胶、炭蜡、明胶等作包埋剂；电子显微镜则用环氧树脂、聚苯乙烯 树脂、异丁烯树脂及水溶性树脂。 石蜡制片法是将材料经固定、脱水、透明、浸蜡后包埋在石蜡里面进行切片的方 法。此法适用范围，制片手段完备，能将材料切成极薄的片子（可切至 2-8 微米 左右），并能制成连续的片子，这是其它制片法难以达到的，因此在光学显微镜 的制片技术上它是最常用的一种方法。除了一些经不住石蜡切片法中所应用的各 种药剂处理的材料不能应用石蜡切片以外，一般的材料都可以用此法制片，但有 制作时间较长，操作过程复杂以及材料易发硬或发脆等缺点。该法多采用旋转式 切片机进行切片。 石蜡制片操作程序如下： （一）材料的采集与分割 采集材料应根据制片的目的和要求而定，材料要有代表性，无病虫害或其它损伤， 如要观察病理解剖，则要取病斑、病症部位。采下的材料应立即放在标本箱或湿 布包起来带回实验室进行分割固定（如有条件也可在试验地采集后进行分割固 定）。为使固定液能迅速的渗透材料，材料要进行分割。分割时动作要迅速，以 防材料萎蔫。分割块的大小，宜小不宜大，一般不超过 1cm3，分割后立即杀死 固定。 （二）杀死与固定 利用药剂迅速把细胞杀死，以保持材料本来的状态和结构。 常用的固定有 F.A.A 固定液、卡诺固定液等。将固定液放在具塞小瓶中，投入材 料，盖好瓶盖。用 F.A.A 固定液固定，时间至少24 小时。F.A.A 固定液既是良好 的固定剂，也是保存剂，因此材料可长期保存在固定液中备用。卡诺固定液穿透 中国试剂网 3.11.5.32 力强，固定较小材料一般 1~6 小时即可，最多不超过 24 小时。因卡诺固定液不 能做保存剂，所以固定后要用 95%、85%酒精浸洗，每级约 20min. ，然后保存在 70% 的酒精中备用。 （三）脱水 脱水的目的是除去组织中的水分，便于透明、浸蜡、包埋等步骤的进行，因为这 些程序中所用的药品都不能与水混合，所以必须脱水。常用的脱水剂为酒精。脱 水过程应缓慢进行，不能操之过急或时间过长，以免组织变硬变脆或发生收缩现 象。脱水采用等级脱水（系列脱水），即从较低浓度酒精开始，逐渐替换到高浓 度酒精。一般为：50%→70%→80%→95% （此时可加少许番红，使组织着色便 于包埋时定位）→无水酒精（两次），每级停留时间 2~4 小时或更长（无水酒精 中时间宜短）。 用 95%酒精配制各浓度酒精的方法：设原有酒精浓度为 A ，所需配制酒精浓度为 B ，则取 Bml 原有酒精，加上 A-Bml 蒸馏水，即可获得 Aml 的 B% 的究竟。例 如：95%酒精配成 70% 的酒精，则取 70ml 的 95%酒精，加上 25ml 蒸馏水，则 配成了 95ml 的70% 的酒精。 （四）透明 透明的目的是将脱水剂从材料中除去，使材料透明，增记折光系数；同时便于下 步的浸蜡和包埋等程序（因为究竟不能溶解石蜡）。透明剂是一种既能与脱水剂 混合，又能与包埋剂混合的药剂。常用的透明剂为二甲苯和氯仿，适用原则也是 逐级进行，可减少材料收缩。一般步骤是：2/3 纯酒精+1/3 二甲苯→1/2 纯酒精 +1/2 二甲苯→1/3 纯酒精+2/3 二甲苯→二甲苯（两次），每级停留时间 0.5~2 小时 或更长些。二甲苯穿透能力强，但又宜使材料收缩变脆，使用时不能在其中停留 时间过长。若材料放入二甲苯中时有白色混浊现象发生，说明材料脱水不彻底， 应把材料退回至纯酒精中再行脱水。 （五）浸蜡 浸蜡的目的是逐渐除去透明剂,并为包埋剂所代替。常用的包埋剂是石蜡。浸蜡 过程是使石蜡慢慢溶于浸有材料的透明剂中，溶解在透明剂中的石蜡渐渐深入到 材料的细胞中去，最后使透明剂完全被石蜡取代，以便切片。 一般所用的石蜡分软蜡（熔点 40 ℃ 以下）和硬蜡（熔点 40 ℃以上）。浸蜡过程 中国试剂网