CpG+ODN对真菌性角膜炎病理改变影响及免疫机制实验的研究.pdfVIP

rll(1lll IlllIIlll IIIIIIl Y1 734377 ODN对真菌性角膜炎病理改变的影响 CpG 及免疫机制的实验研究 摘要 目的 ODN)对小鼠真菌性角膜炎病理改变的影 探讨CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG 响及可能的免疫作用机制。 方法 角膜基质注射法建立BALB／c白色念珠菌性及茄病镰刀菌性角膜炎模型，按 照治疗方法不同分为以下五个实验组：不治疗组(A组)、感染同时结膜下注射 ODN组(B组)、感染同时结膜下注射nonODN组(C组)、感染前 CpG CpG ODN组(D组)及感染前48小时预先结膜下注射 48小时预先结膜下注射CpO non ODN组(E组)。观察记录小鼠角膜真菌感染后的角膜大体病变特点和 CpG 临床病理损害评分，HE／PAS染色检查角膜病理改变及真菌生长情况，真菌培养 计算角膜真菌载菌量，ELISA法检测白色念珠菌性角膜炎小鼠角膜、外周血清及 IgA水平，免疫组化检测白色念珠菌感染后角膜组织中性粒细胞、巨噬细胞及淋 巴细胞侵润情况。 结果 ODN结 无论是白色念珠菌还是茄病镰刀菌FK，感染前4811r预先给予CpG 膜下注射对角膜真菌感染的小鼠有明显的免疫保护作用，能明显减轻小鼠角膜组 织的病理改变，与其他各组相比，显著降低了角膜临床病理损害评分(p0．05)， 并可有效地减少角膜组织的真菌载菌量(pO．05)，有利于真菌病原体的清除以 及角膜溃疡的愈合，病程明显缩短，并不加重角膜组织的炎症性病理损伤；而感 ODN结膜下注射对真菌性角膜炎小鼠无明显的保护或治疗作用， 染同时给予CpG 角膜临床病理损害评分及角膜组织的真菌载菌量与其他各组无明显差异 ODN预先注射组D组小鼠角膜 (p0．05)。在白色念珠菌感染小鼠角膜后，CpG 升后，至感染第14天均持续较高水平，始终显著高于A组、C组、D组及E组 ODN感染同时注射的D组小鼠 IFN吖于感染第一天后开始均逐渐升高。而CpG 角膜感染后，其血清及角膜组织中的IL．12、IFN-丫在感染第一天也明显升高， CpGODN感染同时注射组比不注射组小鼠角膜组织及血清中也可产生更多的 与此同时其感染第一天Th2型细胞因子IL．10及趋化因子MCP．1水平的升高的 ODN注射组 程度也显著高于A组、C组、D组及E组(p0．05)。总体上，CpG 比不注射组小鼠角膜组织及血清中可产生更多的1111型细胞因子IL．12、IFN吖 (pO．05)，并且感染早期D组小鼠角膜及血清比B组及其他各组表现了更为强 ODN注射组比不注射组的小鼠脾细胞在体外 烈的Thl型免疫偏移。同时，CpG 血清及体外培养的脾细胞中特异性抗体IgG、IgM的IgA水平在感染早期均未见 ODN注射组的小鼠在感染早期比不注射组 明显变化。免疫组化结果显示，CpG 的小鼠角膜内可见更多的中性粒细胞、巨噬细胞及淋巴细胞浸润。 结论 ODN预先处理可以激活宿主的抗真菌免疫反应，对 本实验结果显示，CpG 小鼠角膜真菌感染具有明显的免疫保护作用，其可能的免疫作用机制是CpG O