临床分离致病菌株16srrna甲基化酶的研究进展.docx

临床分离致病菌株16S rRNA甲基化酶的研究进展摘要氨基糖苷类抗生素是临床常用的广谱抗生素之一，具有强大的杀菌作用及较长的抗生素后效应，其与β-内酰胺类抗生素联合使用一直是临床治疗由革兰氏阴性菌杆感染引起的感染性疾病的重要手段，但随着医学临床和畜牧兽医业的广泛应用，针对其耐药的菌株不断出现，耐药率上升，严重影响了该类抗生素在临床中的使用。2002年以前，人们一直认为耐药菌株产生的氨基糖苷类修饰酶是主要的耐药机制，但临床分离致病菌株16S rRNA甲基化酶的发现改变了人们的观点。临床分离致病菌株16S rRNA甲基化酶可由质粒介导进行垂直和/或水平播散，使细菌对氨基糖苷类抗生素产生多药交叉耐药及高水平耐药，给临床医生治疗革兰氏阴性杆菌感染带来更加严峻的挑战。关键词氨基糖苷类抗生素、16S rRNA甲基化酶、革兰氏阴性杆菌氨基糖苷类（aminoglycosides）抗生素是由氨基环醇、氨基糖与糖组成的抗生素总称。自1944年首次发现链霉素以来，由于这类药物具有强大的杀菌作用（其通过与细菌S30核糖体的16S rRNA上A位点的一个高度保守基元结合，而引起核糖体功能改变，使细菌在合成蛋白时错误转录并抑制移位，抑制了细菌蛋白质合成，从而破坏其细胞膜完整性而杀灭细菌），且抗菌谱广，并有较长的抗生素后效应，与其他抗菌药物（尤其是细胞壁活性抗菌药物，如β-内酰胺类）合用时有协同作用，所以成为了目前治疗革兰阳性、阴性菌感染，尤其是泛耐药革兰阴性杆菌感染常用的联合治疗药物[1],在医学临床和畜牧兽医业得到广泛应用，但是氨基糖苷类抗生素具有耳毒性、肾毒性等副作用，临床使用中剂量有着严格限制。随着泛用、滥用及不合理使用，耐药问题也随之凸现。本文对氨基糖苷类抗生素的新耐药机制—质粒介导16SrRNA甲基化酶(16S rRNA methylase)的发现、耐药形成机制及在我国临床分离的革兰阴性杆菌中的流行情况作一综述。1、氨基糖苷类抗生素的耐药机制细菌对氨基糖苷类抗生素产生耐药的机制主要有3种：①产生氨基糖苷类修饰酶（aminglycoside-modifying enzyme，AME）包括氨基糖苷类乙酰转移酶(AAC)、磷酸转移酶(APH)及核苷转移酶(ANT)，对进入细菌细胞内的药物分子进行修饰，使之失去生物活性而耐药；②核糖体蛋白或16S rRNA突变，使药物作用靶位改变，药物进入细菌后不能有效地与核糖体结合而产生耐药；③细菌外膜蛋白通透性改变或内膜转运异常，使药物在菌体内的蓄积减少。过去认为，产生氨基糖苷类修饰酶是最常见的耐药机制，因修饰酶具有底物特异性，所以细菌对氨基糖苷类不同品种只呈现不完全交叉耐药。近年来的大量研究发现，16S rRNA甲基化酶(16S rRNA methylase)与氨基糖苷类抗生素多药交叉耐药及高水平耐药具有密切关系[2,3]，已成为研究热点。2、16S rRNA甲基化酶2.1 16S rRNA甲基化酶来源16s rRNA甲基化酶最早在产生氨基糖苷类抗生素的微生物中发现，如：链霉菌属、单孢丝菌属、放线菌属等。是产生氨基糖苷类抗生素的细菌为避免被自己产生的药物“自杀”的一种自我防御的机制。其在S-腺苷甲硫氨酸协同下，对rRNA的转录后甲基化，是一种自我保护机制，曾被认为没有临床意义。2002年以前，16s rRNA甲基化酶基因从未在产生氨基糖苷类抗生素的微生物之外的革兰阴性致病菌中发现过，一直以来人们都认为16s rRNA甲基化酶仅限于环境菌株[4]。2.2 16S rRNA甲基化酶的耐药机制16S rRNA甲基化酶使细菌30S核糖体亚单位中16S rRNA A位点的某个或某几个碱基甲基化，使氨基糖苷类抗生素不能与其作用靶点结合，从而导致细菌耐药。根据核糖体的作用部位，氨基糖苷类抗生素可以分为：①与A位点结合的4，6-二取代脱氧链霉胺类，其中包括卡那霉素组和庆大霉素组；4，5-二取代脱氧链霉胺类，包括新霉素、巴龙霉素等，和其他类包括安普霉素等。②与非A位点结合的链霉素和大观霉素。16S rRNA甲基化酶能使所有与16S rRNA A位点结合的氨基糖苷类抗生素失去作用。3、临床分离菌株16S rRNA甲基化酶3.1 临床分离菌株16S rRNA甲基化酶的发现与分类2002年日本学者Yokoyama等[5]在对1株分离自1997年的铜绿假单胞菌的研究中，发现其对临床使用的所有氨基糖苷类抗生素均高度耐药，包括阿米卡星及阿贝卡星，而介导这种耐药的正是一种16SrRNA甲基化酶RmtA，这是第一次在临床分离的产生氨基糖苷类抗生素的微生物之外的革兰阴性致病菌中发现16SrRNA甲基化酶；随后，2003年法国学者[6]在临床分离的耐多药肺炎克雷伯菌中发现了由质粒介导的耐药机制-16S rRNA甲基化酶ArmA，该酶导致革兰阴性杆菌对