内蒙古地产蒙药材金莲花质量标准研究探究.doc

内蒙古地产蒙药材金莲花质量标准研究探究摘 要 针对目前我国蒙药材质量标准相对落后、检测指标不能代表蒙药材质量的真实情况的现状，利用现代科技方法对蒙药材常用品种“金莲花”的鉴别和含量测定进行了探索。主要利用薄层色谱法摸索了金莲花药材的定性鉴别条件，利用高效液相色谱法摸索了金莲花药材中绿原酸的含量测定条件，还进行了绿原酸含量测定的方法学验证。实验证明，定性鉴别和含量测定的方法可行、条件合适，可以作为金莲花药材质量标准的检验方法。还拟订了金莲花药材质量标准草案，供有关部门在制定相应标准时参考。 关键词 蒙药材 金莲花 绿原酸 质量标准 薄层色谱法 高效液相色谱法 实验条件选择 实验仪器：①仪器：美国Alltech高效液相色谱仪，Alltech426PLC泵，Alltech UVIS200型检测器，Alltech ChromStation色谱工作站，Diamonsil C18色谱柱(5μ 200×4.6mm)，KQ3200DB型数控超声波清洗器。②试剂：乙腈为色谱纯，水为高纯水，其他试剂均为分析纯。③对照品：绿原酸（供含量检测用）。 性状：为金莲花药材外观形态的描述。本实验参考《内蒙古蒙药材标准》1987［1］,对三个产地的金莲花药材进行了实际观察和分析，客观地描述了金莲花药材外观形态的主要特征。 鉴别（1）：为金莲花药材植物组织形态的鉴别。主要参考了《中国药典》2000年版一部［3］和“金莲花的生药学研究”［2］，对金莲花药材粉末的组织形态进行了显微观察和分析比较，实际描述了金莲花药材粉末的组织形态要点。 鉴别（2）：为金莲花药材中绿原酸的LC鉴别。除参考《中国药典》2000年版一部［3］等有关资料外，主要参考了“薄层扫描法测定复方金莲花口服液中绿原酸的含量”［4］的薄层色谱条件。①提取条件：采用了超声处理、浸泡过夜、萃取、水浴回流、过聚酰胺柱和大孔吸附树脂柱等不同条件进行了对比实验。②吸附剂：采用了硅胶G薄层板和聚酰胺薄膜进行了比较。③展开系统：选用了八种展开剂进行了对比实验。醋酸丁酯-甲酸-水(14∶5∶5)的上层液；醋酸乙酯-甲酸-水(8∶1∶1)；醋酸丁酯-甲酸-水(7∶4∶3)的上层液；乙醇-丙酮-水(7∶5∶6)的上层液；醋酸乙酯-氯仿-甲酸(6∶2∶2)；石油醚-醋酸乙酯(6∶4)；环已烷-氯仿-醋酸乙酯-甲酸(6∶15∶15∶4)；36% 醋酸。④检视条件：选用了紫外光灯（365nm）下检视和10%的氯化铝溶液、饱和氨蒸气、5%的香草醛硫酸溶液等五种显色剂。 实验证明，鉴别（2）的实验条件为“醋酸乙酯水浴回流1小时，硅胶G薄层板，以醋酸丁酯-甲酸-水（14∶5∶5）的上层溶液为展开剂，紫外光灯（365nm）下检视”，效果比较理想，Rf值0.42，比较适中。 含量测定：采用PLC法测定有效成分绿原酸的方法，主要参考《中国药典》2000年版一部［3］的方法，具有分离好、灵敏度高、准确度高等优点。①检测波长的选择：参考有关文献，绿原酸的紫外吸收一般在327nm。经光谱测定实验验证，绿原酸的最大吸收波长是327nm。故含量测定中的测定波长定为327nm。②流动相的选择：对二种流动相作了实验比较，甲醇-水-冰醋酸-三乙氨（15∶85∶1∶0.3），乙腈-0.4%磷酸溶液（20∶80）。经试验确证，选用乙腈-0.4%磷酸溶液（20∶80）为流动相，出峰时间适当，色谱峰峰形理想。绿原酸与其相邻色谱峰的分离度大于1.5；按绿原酸峰计算，理论塔板数（n）为2000以上。③供试品的制备：分别进行了超声处理、加乙醇回流、盐酸酸性乙醇回流、加醋酸乙酯回流等实验方法，实验确证，盐酸酸性乙醇回流的提取条件最理想。④空白实验：同时取乙醇加流动相的空白溶液进样，结果表明，空白溶液在绿原酸色谱峰位置处无色谱峰出现。 经实验考察，金莲花药材中绿原酸含量测定的实验条件确定为：盐酸酸性乙醇回流的提取，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.4%磷酸溶液（20∶80）作为流动相；流速为1ml/分；柱温为30℃；检测波长327nm；进样量10μl。 含量测定方法 线性范围的考察：取绿原酸对照品约5mg，精密称定，置50ml量瓶中，加乙醇10ml使溶解，加流动相至刻度，摇匀。精密量取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。按2.5的色谱条件进行测定，以峰面积值对进样量进行回归分析，结果绿原酸在1.936～11.616μg范围内呈良好的线性关系。回归方程为Y=26284X-1074.4，r=0.9999（Y为峰面积积分值，X为对照品量），结果见表1。 精密度试验：取阿盟1号样品溶液按上述含量测定色谱条件，连续进样5次，测定样品中绿原酸峰面