凉血散瘀汤对实验性脑出血大鼠ET TNF-α FIB及TT影响 .doc

凉血散瘀汤对实验性脑出血大鼠ET TNF-α FIB及TT影响 摘　要：目的：探讨凉血散瘀汤治疗实验性脑出血大鼠的可能机制。方法：将60只Wistar大鼠以随机表法随机均分6组：空白组、假手术组、模型组、治疗1组，治疗2组、治疗3组。后4组各采用2次注射自体动脉血法构建大鼠脑出血模型，术后3h治疗1、2和3组分别给予凉血散瘀汤2.4、4.8和7.2mg/(kgd)灌胃，其他3组给予等量生理盐水。应用放射免疫法测定血ET andTNF－α含量。结果：与空白组比较，假手术组血ET和TNF―α轻度升高(P＞0.05)；与假手术组比较，模型组血ET和TNF―α明显升高(P＜0.01)；与模型组比较，治疗组血ET和TNF-α明显下降(P＜0.01)；治疗组间比较血ET和TNF-α下降差不多。模型组和治疗组FIB水平较正常组升高(P＜0.01)。模型组和治疗组TT与正常组比较并无明显差异(P＞0.05)。结论：凉血散瘀汤治疗大鼠脑出血后对神经功能具有保护作用，其机制可能抑制ET表达、TNF-α毒性和降低FIB活性有关。 关键词：实验性脑出血；实验研究；ET TNF-α； FIB；TT 脑出血(intracerebra]hemorrhage，ICH)是指原发性非外伤性脑实质内出血。随着社会经济的发展和生活方式的改变，脑出血的发病率、患病率、致残率均日益增多，它不仅给病人带来长期痛苦和生活质量的下降，而且给家庭和社会造成沉重负担。脑出血后继发的脑水肿、颅内压增高和脑疝形成是其致死的主要原因。因此，寻求其急性期疗效的突破已成为这方面研究的重要课题，而急性期运用凉血化瘀法治疗是普遍关注的热点。本研究通过2次注射自体动脉血法构建大鼠脑出血模型观察凉血散瘀汤对大鼠脑出血后血ET、 TNF-α 、TT和FIB的影响。 1　材料和方法 1．1试剂与仪器主要试剂ET和TNF―α试剂盒：中国人民解放军总医院科技开发中心放免研究所；江湾I型C立体定向仪；50μL微量注射器。 1．2药品凉血散瘀汤 由制大黄6g、炒蒲黄20g、水牛角30g、地龙20g、水蛭20g等组成，具体煎制方法是先煎水牛角30min左右。然后加入桃仁、炒蒲黄(包煎)、地龙、水蛭煎约20min，最后加入制大黄煎约10min制成汤剂100mL。 1．3实验动物及分组健康Wistar雄性大鼠60只，体重(200±10)g，雌雄各半，采用蒸馏水及颗粒型普通大鼠饲料喂养，由中国医学科学院动物实验中心提供，实验动物级别为清洁级。采用随机数字抽样法。分为6组，即空白组、假手术组、模型组、治疗1组、治疗2组、治疗3组，每组10只。 1．4模型制备采用两次注射自体动脉血法构建大鼠脑出血模型术前禁食，自由饮水。用10％水合氯醛(4mL/kg)腹腔注入，仰卧位固定，右侧腹股沟备皮，常规局部消毒，纵行切口，暴露并分离股动脉，用肝素化50μL微量注射器穿刺股动脉抽取50μL自体动脉血。将大鼠固定在立体定位仪上，头部皮肤消毒，切开颅顶部皮肤，暴露颅骨，去除骨膜。用牙钻钻一个直径2mm的圆孔至硬膜，将注血针没钻孔垂直进针至靶点(靶点定位于前囟前0.2mm、中线左侧旁3.0mm、颅骨外表面下6mm)。缓慢注射25μL(注射速度10μL/min)，静置5min后再以同样的速度注射另一半，原位留置注血针30min后缓慢起针，骨蜡封闭骨窗，自然苏醒。假手术组注入等量0.9％生理盐水，手术过程同模型组。术后神经功能评分参照Longa法(0-4)：0分：无神经功能缺损症状；1分：对侧前爪不能伸直；2分：行走时向患侧偏转；3分：向患侧倾倒；4分：不能行直，意识障碍。剔除0分、4分和死亡大鼠。 1．5血ET和TNF-α的测定于术后3天取大鼠下腔静脉2mL，注入含10％EDTA二钠30μL和抑肽酶40μL的试管中，混匀，4℃，3000r/min离心10min，分离血浆，采用放射免疫法测定。 1．6血TF和FIB的测定于术后3天，0.109mol/L酸钠抗凝的试管取大鼠下腔静脉2mL，Sysmex CA-1500凝血分析仪进行分析。 1．7统计分析所得结果均以均数(x±s)表示，所有数据均经微机运用SPSS统计软件贮存、转换及运算。组间均数比较采用方差分析和t检验。 2 结果 见表1一表2。 与空白组比较，假手术组血ET和TNF―α轻度升高(P＞0.05)；与假手术组比较，模型组血ET和TNF―α明显升高(P＜0.01)；与模型组比较，治疗组血ET和TNF-明显下降(P＜0.01)；治疗组间比较血ET和TNF―α下降差不多。模型组和治疗组FIB水平较正常组升高(P＜0.01)。模型组和治疗组TF与正常组比较并无明显差异(P＞0.05)。见表2。