加味射干麻黄汤对支气管哮喘小鼠模型影响 .doc

加味射干麻黄汤对支气管哮喘小鼠模型影响 摘要：目的：观察加味射干麻黄汤对哮喘小鼠模型血清中干扰素－γ(IFN－γ)和氧自由基的影响，探讨其作用机制。方法：将40只小鼠随机分组为正常对照组、哮喘组、中药组、西药组，每组10只。采用卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏和雾化激发的方法建立小鼠支气管哮喘模型，然后用不同的措施对哮喘小鼠模型进行干预。干预完成后，采用ELISA方法检测每只小鼠血清中IFN－γ水平，分光光度法检测小鼠肺组织中超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)含量。并对各组小鼠肺组织进行病理形态学观察。结果：模型组与正常组相比。前者血清中IFN－γ水平显著降低(P＜0.01)；肺组织中SOD活性显著降低(P＜0.05)；伴MDA含量增高(P＜0.01)。中药组和西药组与模型组相比，前二者血清中IFN－γ水平则高于模型组(P＜0.05-0.01)；肺组织中SOD活性明显升高(P＜0.01)而MDA降低(P＜0.01)。正常对照组IFN－γ水平、肺组织SOD和MDA活性与中药组及西药组比较，无统计学意义(P＞0.05)；中药组IFN－γ水平、肺组织中SOD和MDA与西药组比较亦无统计学意义(P＞0.05)。结论：通过促进哮喘小鼠体内干扰素－γ表达，提高肺组织抗氧化能力，从而减轻气道免疫炎症、降低支气管高反应性可能是加味射干麻黄汤治疗哮喘的作用机制之一。 关键词：哮喘；射干麻黄汤；IFN－γ；氧自由基 支气管哮喘是一种气道的慢性炎症性疾病。是由多种炎症介质、炎症细胞和细胞因子参与的相互作用的结果。大量研究证实Th亚群失衡在哮喘发病过程中具有重要作用，表现为Tht功能相对抑制，Th功能相对亢进，导致炎性细胞浸润，这些炎性细胞聚集、激活过程中可产生大量的氧自由基，引发了脂质过氧化作用，加重炎症反应，造成肺组织损伤。因而纠正Th亚群失衡、减轻脂质过氧化反应已成为当今哮喘治疗的新课题。中医药在支气管哮喘的治疗方面历来有其独特的优势，本次实验采用方药是以张仲景《金匮要略》中咳喘治疗的代表方剂射干麻黄汤为基础加味而成，旨在观察IFN－γ和氧自由基在加味射干麻黄汤干预后表达水平的变化，来探讨其作用机理。 1　材料与方法 1．1材料与试剂健康、昆明种、普通级小鼠40只，雌性，体重18-22g。由辽宁中医药大学动物实验中心提供。加味射干麻黄汤每剂由射干15g，麻黄8g，教冬花15g，细辛3g，紫菀15g,地龙15g，五味子15g,半夏15g，生姜15g，大枣6枚，甘草15g等12味共161.5g(70kg为成人每日常规用量)生药组成，用蒸馏水1000mL，先煎麻黄5min，后人余药，共水煎2次，然后过滤，浓缩为混悬液220mL(每1mL含生药0.74g)。地塞米松片系浙江仙居制药有限公司生产，0.75mg/片，以蒸馏水配成0.12mg/mL药液。卵蛋白片由天津化学试剂厂生产；氢氧化铝由沈阳化学试剂厂生产；小鼠IFN－γ(ELISA)试剂盒购于深圳晶美生物工程有限公司；SOD试剂盒、MDA试剂盒及考马斯亮蓝蛋白试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。 1．2 方法①40只小鼠随机分为4组，即正常对照组、哮喘模型组、中药干预组、西药干预组，每组10只。模型组、中药组、西药组小鼠均于实验第1、7、14天腹腔注射致敏药液0.5mL(OVA15μg，氢氧化铝2mg，加生理盐水致0.5mL)，于21天令小鼠雾化吸入1％OVA，每次30min，每天2次，共10天。模型组小鼠每次雾化前灌胃注入蒸馏水0.5mL/只，中药组小鼠每次雾化前灌胃注入加味射干麻黄汤煎剂0.5mL/只(给药按体表剂量系数换算)，西药组小鼠每次雾化前灌胃注入地塞米松药液0.5mL/只。正常对照组小鼠第1、7、14天腹腔注射生理盐水0.5mL/只，并于第21天开始令小鼠雾化吸入生理盐水，每天2次，每次30min，共10天，每次雾化前灌胃注入蒸馏水0.5mL/只。实验第3l天对各组小鼠行眼动脉采血处死，并离心取血清备用。右肺用4％甲醛固定后，常规石蜡包埋、切片，HE染色观察病理变化。左肺称重后匀浆制成10％悬液，离心取上清。②干扰素－γ和氧自由基物质检测：严格按照小鼠IFN－γ(ELISA)试剂盒说明书及SOD、MDA测定试剂盒说明书进行操作。 1．3统计学处理实验数据采用SPSS11.0进行统计学处理，结果以X±s表示，采用单因素方差分析，P＜0.05视为统计学有意义。 2　结果 2．1 小鼠血清IFN－γ及肺组织中SOD MDA的检测数值见表1。 模型组小鼠与正常组小鼠相比，前者血清中IFN－γ水平显著降低(P＜0.01)；肺组织中SOD活性显著降低(P＜0.05)，伴MDA含量增高(P＜0.01)。中药组和西药组小鼠与模型组小鼠相比