加味肾气汤防治慢性镉中毒大鼠肾脏损伤实验探究.doc

加味肾气汤防治慢性镉中毒大鼠肾脏损伤实验探究摘要：目的：补肾活血法防治慢性镉中毒大鼠肾脏损伤。方法：在金匮肾气汤(丸)的基础上，加入补血、活血、补气、理气之品，同时厘定桂枝、附子两味药与滋阴药的比例。大鼠经遣模、治疗后，从组织学、肾脏皮质镉含量、细胞凋亡等方面对中药防治镉致大鼠肾脏慢性损伤加以研究。结果：中药治疗组各项检测指标均优于模型组和对照组。结论：加味肾气汤能有效拮抗镉的慢性毒性，降低大鼠肾脏损伤程度，其机理可能与驱镉、抗凋亡有关。 关键词：肾脏慢性损伤；补肾活血法；加味肾气汤 中图分类号：R285.5 文献标识码：A 　文章编号：1673-7717(2007)12-2580-03 镉(cadmium)作为一种有毒重金属，在工业中用途广泛，半衰期长，不易降解，是常见的环境和工业污染物。它主要经呼吸道和胃肠道吸收进入人体，对肾、肺、肝、睾丸、卵巢、脑、骨骼及血液系统均可产生毒性，肾损伤是慢性染镉的主要危害，其病理改变波及整个肾脏，常发展为慢性肾衰。一般认为镉导致的慢性肾损伤不可逆，有人提出用硒来拮抗镉的毒性，但硒的治疗剂量与中毒剂量很接近，安全系数很低。因此，对慢性镉中毒尚无满意的疗法。有鉴于此，笔者在中医药理论的指导下，运用中药拮抗镉的慢性毒性，观察中药对慢性镉中毒大鼠肾脏的保护作用。 1.实验材料 实验动物：SD大鼠48只，雄性。南京中医药大学动物实验中心提供。 加味肾气汤组成药物地黄、山茱萸、山药、丹皮、泽泻、茯苓、桂枝、附子等中药饮片购自南京中医药大学门诊部，经鉴定符合中华人民共和国药典(2005年出版)要求。中药饮片用10倍量水煎煮两次，药液合并，60℃浓缩至饮片重量：药液体积为1g：1mL。 　CdCl22.5H2O，分析纯，上海亨新化工厂；NaSeO，分析纯，上海振欣化学试剂厂；HCLO，GB级，天津鑫源化工厂；HNO，GB级，南京化学试剂一厂；镉标准贮备液，国家标准物质研究中心；碘化丙啶(PI)，Sigma公司。 2.实验方法 2.1实验动物分组及处理　雄性SD大鼠随机分为4组，每组12只，喂以常规饲料，正常组饮自来水，模型组、中药治疗组及治疗对照组饮200mgL的氯化镉溶液。自实验第3周起给药组以2.7mL100g的剂量灌胃，治疗对照组给予亚硒酸钠0.05mgkg。于第14周分别置于代谢笼中(禁食，自由进水)留取24h尿液后脱臼处死，留取两侧肾脏。在整个实验过程中，常规观察动物一般情况，每隔1个月及处死前用体重仪称量大鼠体重。 2.2组织病理学检测 10％甲醛固定大鼠肾脏后，由江苏省中医院病理科完成检测。 2.3肾脏皮质镉含量的检测　湿式消化法将肾脏皮质部分进行消化后，石墨炉原子吸收法测定镉的含量。 2.4肾脏近曲小管上皮细胞凋亡检测 分离、剪碎肾皮质并置于80目不锈钢网筛[内径(180±7.60μm)]，研磨并用生理盐水充分冲洗于100目不锈钢网筛[内径(150±6.6μm)]，网上物即为近曲小管上皮细胞，离心收集细胞，0.25％胰酶-0.4％EDTA消化成单细胞悬液，PBS洗，300目尼龙网过滤，制成0.5mL PBS悬浮细胞，加入1.5mL PI染色液，4℃避光30min，流式细胞仪检测，multieyele软件分析结果。 2.5 统计方法　应用SPSS11.0软件进行统计学分析，平均值以标准差反映离散水平，两组之间差异显著性进行t检验分析。 3.结果 正常组大鼠毛发浓密、光亮，活动灵活、有力，体重增长迅速；模型组大鼠毛发特别是脑部毛发稀疏、干涩，运动迟缓、喜蜷卧，体重增长缓慢；中药治疗组及治疗对照组体重增长率介于正常组与模型组之间，其中，中药组作用优于治疗对照组。 3.1组织病理学检测　染毒大鼠肾脏外观呈不同程度肿大、质地比正常组坚韧，光镜下见肾近曲小管变性及高度肿胀、少数呈空泡样变，部分小管坏死、管腔塌陷，局部淋巴细胞浸润及纤维组织灶样增生，部分肾小球球囊壁粘连；治疗对照组各种病变程度均有不同程度的减轻；中药组则很少见肾小管和肾小球病变，与模型组相比有明显差异(图1)。 3.2肾脏皮质镉含量检测 肾脏皮质镉含量数据表明，慢性染镉使镉在大鼠肾脏的蓄积量极其显著地增加；中药组有明显的驱镉作用，镉的蓄积量大为降低；治疗对照组也有一定的驱镉作用，但作用不及中药组显著(表1)。 3.3肾脏近曲小管上皮细胞凋亡检测 在图2中，每组细胞主要由G/G期细胞(二倍体)组成，二倍体峰之前即为凋亡峰(亚二倍体)，正常组、模型组、中药治疗组、治疗对照组的凋亡率依次为6.84％、34.04％、6.98％、26.25％。中药治疗组凋亡率与正常组极其相近，具有明显的抗凋亡效果；治疗对照组凋亡率比模型组