姜黄素抗博莱霉素诱导大鼠肺纤维化实验探究.docVIP

姜黄素抗博莱霉素诱导大鼠肺纤维化实验探究摘要：目的:探讨姜黄素对博莱霉素（BLM）致肺纤维化的治疗作用。方法:复制大鼠博莱霉素致肺纤维化模型，采用光镜观察组织学改变，测定肺组织羟脯氨酸(Hyp)、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛(MDA)以反映肺细胞损伤及肺纤维化的程度。结果:姜黄素能降低实验性肺纤维化大鼠过高的肺组织中Hyp、MDA的含量，提高大鼠体内的SOD的含量。病理组织学检查亦表明，姜黄素明显改善实验性肺纤维化。结论:姜黄素对实验性肺纤维化具有一定的治疗作用。? 关键词：肺纤维化；姜黄素；脂质过氧化? 中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1673-7717（2007）04-0698-03 姜黄素(Curcumin)是从中药姜黄（Curauma longaL.）中提取的一种酚性色素，通常作为调味品及化妆品使用。近年的研究表明姜黄素具有广泛药理作用，目前的实验研究多集中在姜黄素的抗氧化?[1]、抗诱变?[2]、抗缺血?[3]、降血脂的作用上。有研究发现，姜黄素可能具有抗肝纤维化的作用?[4]。但姜黄素是否对肺纤维化有作用目前尚未见报道。为此，笔者拟采用博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化模型，探讨姜黄素的抗肺纤维化作用。? 1材料? 1.1药物姜黄素（四川金郁金科技有限公司生产，批号050302，含量95.6%），醋酸泼尼松片（实验中作为阳性对照药，天津太平洋制药有限公司生产，批号050102），注射用盐酸博莱霉素（日本化药株式会社生产，批号740140）。? 1.2动物SD雄性大鼠144只，体重（198±7）g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，动物级别：SPF／V，AF，许可证编号：SCXK2002－0003。? 1.3试剂Hyp试剂盒，SOD试剂盒和MDA试剂盒购自南京建成生物工程公司。? 1.4仪器722S可见分光光度计，低温高速离心机，微量加样器，恒温水浴锅，混旋器，匀浆器，分析天平。? 2方法? 2.1动物造模方法?[5]用1.5%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉（2.5mL/kg），仰卧固定于鼠台上，颈部酒精消毒后逐层分离并暴露气管，注射器经气管软骨环间隙朝向心端刺入气管，然后缓慢注入0.3mL博莱霉素生理盐水溶液（5mg/kg）或生理盐水溶液，继续注入0.3mL的空气，注后立即将动物直立并左右旋转，使药液在肺内均匀分布。其中假手术组大鼠肺部注入等体积的生理盐水。实验期间，大鼠自由饮水和进食。? 2.2动物分组和给药方法动物分组：SD雄性大鼠随机分为6组，模型组，姜黄素防治组分高，中，低剂量3组；阳性药物组（醋酸泼尼松片），造模同模型组；假手术组（气管内注入0.3mL生理盐水），每组24只。? 给药方法：SD大鼠造模后第1天，分别给各组大鼠生理盐水，醋酸泼尼松，姜黄素。姜黄素在使用时将其溶于0.5%羧甲基纤维素钠配成混悬液。醋酸泼尼松片在使用时用蒸馏水溶解，配成混悬液。其中假手术组，模型组大鼠分别给予生理盐水，给药剂量为0.014L/(kg#8226;d)。醋酸泼尼松组大鼠给予醋酸泼尼松混悬液，给药剂量为0.56mg/(kg#8226;d)。姜黄素高剂量组，中剂量组，低剂量组大鼠分别给予50，100，200mg/(kg#8226;d)姜黄素羧甲基纤维素钠溶液。? 2.3取材方法大鼠在造模7、14、28天后分3次取材，每次各组随机处死8只，共48只。具体步骤：大鼠腹腔注射1.5%戊巴比妥钠溶液麻醉（2.5mL/kg）后将大鼠固定，腹主静脉取血，取肺脏冷生理盐水清洗后，取适量置于-60℃冻存备用。? 2.4肺组织匀浆制备方法取出所需肺组织，放入冷生理盐水中漂洗除去浮血，滤纸吸干后，在冰浴上剪成碎块，称取适量组织，加入9倍量预冷的生理盐水，以冰浴中快速研磨制成10%组织匀浆，在4℃离心10min，转速为3000r/min，取上清液进行测定。? 2.5各生化指标测定方法按试剂盒说明书步骤进行。? 2.6肺组织病理学检查取肺，按常规病理学方法进行固定，包埋，切片。将病理切片分别进行HE，Mallory染色。? 2.7实验结果处理实验数据采用统计软件SPSS11.0进行单因素方差分析，实验结果采用±s表示。? 3实验结果? 3.1肺组织羟脯氨酸（HYP）的含量测定结果见表1。与假手术组比较，7、14、28天时模型组大鼠血清中HYP的含量均明显升高（P 1