杜仲总多糖提取及其对环磷酰胺致肝损伤小鼠保护作用.docVIP

杜仲总多糖提取及其对环磷酰胺致肝损伤小鼠保护作用摘要：目的：研究杜仲总多糖对环磷酰胺所致肝损伤小鼠的影响。方法：用水提醇沉法制备杜仲总多糖，应用环磷酰胺建立肝损伤模型，给予不同剂量杜仲总多糖后，测定血清谷丙转胺酶(ALT)、谷草转胺酶(AST)、肝组织的丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)等各项指标。结果：杜仲总多糖能显著降低环磷酰胺致肝损伤小鼠血清ALT、AST值(P＜0.05)、肝组织的丙二醛MDA值，并能明显降低肝组织SOD值。结论：杜仲总多糖对环磷酰胺致小鼠肝损伤有较好的保护作用。 关键词：杜仲总多糖；环磷酰胺；肝保护作用 中图分类号：R285.5　文献标识码：A　文章编号：1673－7717(2007)09－1896－04 杜仲Eucommia ulmoidesOliv.EUO，又名思仙、思仲、木棉等，在我国南自五岭，北至长城的广阔地区普遍种植，是我国特有的植物资源。杜仲人药已有2千多年的历史，《神农本草经》将其列为“药之上品”，具补中益气、坚筋骨、强志、安胎、久服轻身耐劳之功效。《中药大辞典》和《本草纲目》中载杜仲，归经入肝，肾经。杜仲总多糖(Eucommiaulmoides Oliv Polysaccharides，EOP)是从杜仲科植物杜仲的干燥树皮中提取出的水溶性糖性成分，是近年来发现的杜仲又一活性成分。本次实验首次观察杜仲总多糖对传统化疗药物环磷酰胺致肝损伤小鼠的保护作用，并初步探讨其作用机制，为杜仲的进一步开发利用提供实验依据。 1　材料与仪器 1．1　实验动物　昆明种清洁级8周龄小白鼠，60只，体重(2l±4)g，雌雄各半，由泰山医学院实验动物中心提供，合格证号：鲁动质字020103。标准饲料喂养，实验前试养5天。 1．2　药品与试剂　杜仲，中药饮片，由本校中药学教研室高红莉老师鉴定为真品；环磷酰胺粉针剂，上海华联制药有限公司生产，批号：041109(用时以生理盐水配成2mg／mL溶液)；联苯双酯滴丸，德州德药制药有限公司生产，批号：051013(用时以生理盐水配成8mg／mL混悬液)；维生素C注射液(Vitamin C)，山东鲁抗辰欣药业有限公司，批号：050901；ALT、AST、SOD、MDA试剂盒，南京建成生物工程研究所提供。 1．3　实验仪器　RE－52A型旋转蒸发器，上海亚荣生化仪器厂；SHB－1395A型循环水式多用真空泵，郑州长城科工贸有限公司；SPectrumlab54紫外可见分光光度计，上海棱光技术有限公司造。 2 方　法 2．1　杜仲总多糖的提取分离　取杜仲皮300g，粉碎，用4倍体积的95％乙醇回流4h，冷却过滤，滤渣晾干即为提取多糖的预处理材料。在预处理材料，加入8倍体积的蒸馏水于80℃水浴中提取2h，过滤，滤渣继续用8倍体积的蒸馏水于80％水浴中提取2h，如此重复2次，合并3次滤液，滤液并于70℃浓缩至原体积的1／10，得粗提液。取粗提液加入1／5倍体积的氯仿和1／25倍体积的正丁醇，振荡10min，在4000r／min下离心10min，分离，水相再如此重复3次，得最终水相溶液。水相溶液用4倍体积的95％乙醇醇沉，静置过夜，依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤沉淀，沉淀烘干称重，即得提取物结晶品。 2．2　实验分组及给药方法　取健康小白鼠60只，体重(21±4)g，雌雄各半，随机分为6组，分别为空白对照组，模型组，阳性药联苯双酯组0.2mL／10g，杜仲总多糖高、中、低剂量组(200、100、50mg／kg)，除空白对照组外，余动物第1、3、5、7天均腹腔注射(ip)环磷酰胺40mg/kg；杜仲总多糖高、中、低剂量组，联苯双酯组按指定剂量灌胃给药，空白对照组和模型组给予等量生理盐水(NS)。末次给药后，动物禁食不禁水12h，之后小鼠眼球静脉丛取血，3500r／min离心后，参照赖氏法，按试剂盒使用说明书操作测ALT、AST。而后将小鼠迅速剖腹，每只取相同部位肝组织100mg,4℃下制备2％异丙醇肝匀浆液，3000r／min离心15min，取上清液测MDA值。同法取肝组织200mg，4℃下制备10％的生理盐水肝匀浆液，离心取上清液测定SOD值。 2．3　统计学方法　应用SPSS10.0中相应程序对数据进行统计学处理，两组间均数采用t检验，组内比较采用单因素方差分析。 3 结　果 3．1　多糖的提取结果　杜仲生药300g经提取烘干后得杜仲提取粗品9.3g。杜仲提取物呈咖啡色结晶，不易吸湿，易溶于热水。 3．2　对环磷酰胺致肝损伤小鼠血清ALTAST的影响给予环磷酰胺后，模型组小鼠血清ALT、AST活性显著性升高(P＜0.05)；与模型组相比杜仲总多糖中、高剂量组小鼠血清ALT、AST活性下降，且可