正交法优化海带中岩藻多糖提取工艺探究.docVIP

正交法优化海带中岩藻多糖提取工艺探究摘要：目的研究岩藻多糖的提取工艺。方法采用正交优化法，以海带为原料，最佳组合为料液比(1g:20mL)，温度80℃，提取3次，提取时间10h。结果岩藻多糖得率25％，经柱层析纯化，纯度达93％。结论此工艺操作简便，成本较低。 关键词：岩藻多糖；海带：提取工艺；正交优化法 中图分类号：Q538 文献标识码：A 文章编号：1672－979X(2010)05－0165－03 在很多海藻中均能获得岩藻多糖。海带为海带目海带科的一种大型褐藻，富含岩藻多糖，具有易采集、成本低等特点。岩藻多糖的主要成分是三，岩藻糖，线性主链是岩藻吡喃环以a－1，3－糖苷键连接而成。研究表明，岩藻多糖具有抗氧化、清除自由基(清除自由基的能力高于维生素c溶液清除羟自由基的能力)及抑制致癌因子的功能，长期服用无副作用，因此有望开发为抗肿瘤新药。日本学者还研究发现一种名为“MC 26”的新型岩藻多糖类物质，具有良好的抗流感病毒、抑制高致病性禽流感病毒株复制的效果，有望直接开发成为抗各种流感及禽流感的新药。 为达到节约成本、提高效率，并实现岩藻多糖大规模生产的目的，现以市售海带为原料研究岩藻多糖的提取工艺，为岩藻多糖生产提供参考数据。 1　材料 1.1材料与试剂 海带(散装干海带，购自济南大润发超市)。 海藻糖(上海恒信化学试剂公司)：蒽酮(国药集团化学试剂公司)；无水乙醇(上海南翔试剂公司)；阿利新蓝(南通林港化工公司)。 1.2仪器 组织捣碎机(HGB550，美国WARING)：恒温水浴锅(DK－8D型，上海精宏公司)；离心机(CR2082，日立)：紫外分光光度计(Photolab 6600，德国WTW)；真空冷冻干燥机(FD－1A－50，北京博医康公司)；超滤设备(MSC300超滤杯／杯式超滤器，上海摩速公司)。 2　方法 2.1提取海带中岩藻多糖的工艺流程设计 海带捣碎－海带粉恒温水浴－过滤－浸提物－加稀盐酸调pH2.5－离心－上清液－加氢氧化钠溶液调pH7.0－浓度60％乙醇醇析－沉淀－无水乙醇洗涤数次－冷冻干燥－粗岩藻多糖－柱层析纯化－精制品 2.2考察影响岩藻多糖提取的因素 用正交设计法考察料液比、提取温度、提取次数、提取时间对岩藻多糖产量的影响。4项因素各取3个水平，正交表L9(34)，各因素、水平见表1。 2.3葡聚糖凝胶柱层析纯化 Sephadex G－100在0.1mol／L NaCl洗脱液中溶胀平衡，湿法装柱(2.6cm×56cm)。洗脱液平衡，上样，流速10mL／h，每20min收集1管，硫酸，苯酚法监测至无糖检出为止。 2.4岩藻多糖的纯度测定 醋酸纤维薄膜电泳：电压10～20V，巴比妥一巴比妥钠缓冲液(pH8.6，浓度0.07mol／L)，电泳80min，阿利新蓝染色。 2.5粗岩藻多糖中岩藻多糖的含量测定 蒽酮比色法测定岩藻多糖含量。 2.5.1制作标准曲线 取7支干燥洁净试管，编号后每管分别加入100mg／mL海藻糖标准液0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.6，0.8mL，再分别加水至总体积1.0mL，立即混匀，迅速置于冰浴中，待各管均加入葸酮试剂10mL后，同时置于沸水浴中，准确加热7min，立即取出置于冰浴中，迅速冷却。待各管溶液达到室温后，用1cm厚度的比色皿，以第1管为空白，迅速测其余各管的吸光度值(A620nm)。然后以第2～7管溶液含糖量(ug)为横坐标，吸光度为纵坐标，制作含糖量与A620nm值相关的标准曲线。 2.5.2测定岩藻多糖含量取4支试管按表4操作。具体操作与制作标准曲线相同。根据2～4管A620nm平均值从标准曲线上查相应的含糖量，再换算成100mg样品中总糖的含量。 3　结果与讨论 3.1最佳提取工艺的筛选结果 结果见表2。 由表2可见，温度的极差最大，其它依次是提取次数、提取时间、料液比，各因素的主次关系：BCDA。提取因素的最佳组合为：料液比1g:20mL，温度80℃，提取3次，提取时间10h。 3.2岩藻多糖纯度测定结果 用醋酸纤维薄膜电泳法测定岩藻多糖纯度，电泳结果为单一的斑点。用薄膜扫描法定量测得岩藻多糖纯度为93％。 3.3含量测定结果 以海藻糖标准液(100mg／mL)为标准作标准曲线，得回归方程Y=0.172X+0.003(r=0.988)。 样品溶液吸光度的平均值约0.0457，通过标准曲线趋势线得多糖含量为25％。 最终筛选出的最佳工艺条件为：料液比1g:20mL，温度80℃，提取3次，提取时间10h。此工艺操作简便，成本较低。