正交试验提取大黄蒽醌类工艺探究.docVIP

正交试验提取大黄蒽醌类工艺探究摘 要 目的：考察以乙醇为溶剂对大黄蒽醌提取率的影响。方法：采用正交试验考察提取时间、提取次数、乙醇浓度和乙醇用量四个因素三水平对大黄总蒽醌、游离蒽醌和结合蒽醌提取率的影响。结果：四个因素对三个指标的影响不尽相同，经综合评价确定最佳工艺为加5倍量95%乙醇回流提取3次，每次0.5小时。? 关键词 大黄 大黄蒽醌 正交试验? 资料与方法? 仪器：UV2300 型双光束双波长紫外分光光度计。试剂：均为分析纯。对照品：大黄素。药材：大黄购于广州，经鉴定为蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatum L. 的干燥根茎。? 含量测定:①标准曲线及线性范围考察：精密称取大黄素对照品，置100ml容量瓶中，用氯仿溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度为0.097mg/ml的对照品溶液。精密吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0ml分别置25ml量瓶中，加热挥去氯仿，加混合碱液（5%NaOH-2%NH4OH）溶解并稀释至刻度，摇匀，以混合碱液为空白，在427nm处分别测定吸收度??［1］?，计算的回归方程：A=26.289C-0.005，回归系数r=0.9997，浓度C在?0.00388?～0.0349mg/ml范围内呈良好的线性关系。②总蒽醌与游离蒽醌含量测定：总蒽醌的含量测定：取各大黄提取液1ml，加2.5mol/LH2SO415ml加热回流5分钟，移出，静置5分钟，冷水浴冷却，取60ml CHCl?3分4次回流提取酸液3分钟，分离并合并氯仿层， 用混合碱液萃取至碱液层无色为止， 合并碱液， 定容至100ml，以混合碱液为空白，在527nm处测定吸收度，将测定结果代入回归方程，计算含量。 ? 游离蒽醌的含量测定：各取大黄提取液2ml，加蒸馏水15ml，以下自“取60ml氯仿”起与总蒽醌的含量测定项下同。? 正交试验：同时考察提取时间、提取次数、乙醇浓度和乙醇用量四个因素。设计因素水平见表1。选用正交表L9(34)进行表头设计和安排试验，试验方式及结果见表2。本正交试验方差分析的误差可通过重复试验获得，为此进行了重复试验。? 结 果? 采用SPSS11.0分别对各指标进行了方差分析，并计算了各因素水平下三个指标的平均值（表3）。? 三项指标均以B3、D3为好，故B、D因素取B3、D3为最优条件；对于C因素，总蒽醌与结合蒽醌指标均以取C1为好，且均有极显著差异，对游离蒽醌来说，C因素影响无显著意义，故C因素取C1；但A因素较难平衡，对于总蒽醌来说，A因素无显著性意义可任选一水平，而对游离蒽醌和结合蒽醌而言重要性相同，从节约能源考虑，选择A1更合适。因此，大黄最佳的提取工艺为：取大黄药材，粉碎成粗粉，加5倍量95%乙醇回流提取3次，每次0.5小时。? 讨 论? 由于大黄富含鞣质等黏性成分，在提取时如果大黄粉碎过细，溶剂反而不易浸入药材组织，有效成分不易被提取。目前大黄的提取方法很多，各种方法对大黄中蒽醌类成分的提取率都有不同的影响??［2］?。煎煮法提取由于受热时间过长，大黄蒽醌成分，特别是大黄素存在湿热降解情况??［3］?，因此水煎煮法会降低大黄蒽醌成分的提取收率。因此，我们采用醇提法这种最经典的方法，乙醇用量、提取时间、乙醇浓度、提取次数等对大黄的提取率都有影响。根据提取液的大黄总蒽醌、游离蒽醌和结合蒽醌含量综合考虑，确定最佳工艺为大黄粉碎成粗粉，加5倍量95%乙醇回流提取3次，每次0.5小时，结果与文献报道基本一致。本法的特点是简便、经济。? 参考文献? 1 张志荣,侯世祥,黄园,等. 大黄及其复方中药制剂中蒽醌衍生物的含量测定. 华西药学杂志, 1994, 9 (4) :225.? 2 刘翠哲， 刘喜纲， 王汝兴. 大黄中总蒽醌的提取工艺研究进展.天津药学，2004，16（4）：40.? 3 苏子仁，周华，刘中秋. 大黄在提取精制工艺中的化学变化研究. 药物分析杂志， 1998，18（2）：83.? 1