阿克拉霉素影响骨髓增生异常综合征细胞株细胞增殖及其机制的初步研究.PDF

维普资讯 · 88 · JournaIofP~tcticaIo 。盯Vo1．17 No．22008 阿克拉霉素影响骨髓增生异常综合征细胞株 细胞增殖及其机制的初步研究 林茂芳 ．熊 红，蔡 真 ，俸红艳 ，钱文斌，蒋燕灵 (浙江大学医学院附属第一医院血液科．浙江 杭州 310003) 摘 要 ：目的 探讨阿克拉霉索(aclacinomycJn，ACM)对骨髓增生异常综合征(myelodysplasttcsyndrome． MDS)细胞株(MUTZ一1)细胞的体外作用及其机制，以期为进展期MDS的治疗提供理论基础。方法 采用MTT 比色法、流式细胞术、DNA凝腔电棘法研究ACM对MUTZ一1细胞生长的影响。结果 (1)ACM 对MUTZ一1细胞 的生长具有抑制作用，其蚰 小时Icso为0．46vmoi(2)ACM 对MUTZ-1细胞的作用主要为诱导稠亡。(3)ACM诱 导MUTZ1细胞凋亡，阻滞细胞于细胞周期的G2／M 期。结论 ACM 可诱导MDS细胞株细胞凋亡，作用靶点位 于G ／M 期 提示诱导细胞凋亡疗法治疗进展期MDS的可行性。 关键词 ：阿柔比星／治疗应用；骨髓增生异常综合征／授药与剂量；细胞，培养的 中围分类号：R973 文献标识码 ：A 文章编号 1001—1692(2002)02—0088—05 骨髓增生异常综合征 (MDS)是一类多能造血 美公司；Nucycl—PI试剂盒为 Exalpha生物公司产 干细胞的克隆增殖性疾病，其主要特征是骨髓无效 品。 造血、外周血细胞减少、有明显向急性 白血病 (AL) 1．3 MTT比色法分析 ACM 对细胞生长的影响 转化 的倾向、对治疗反应差，已日益成为临床关注的 取对数生长期细胞，新鲜培养液洗涤后，重悬于含 热点 为研究MDS细胞对药物治疗的反应，我们以 1O FBS的RPMI一1640培养液中．接种于 96孔培 MDS(RAEB型)细胞株一MUTz一1作为研究MDS 养板 (丹麦产品)，加入不同浓度 ACM ，空 白对照组 治疗的模型 ，在体外初步研究了阿克拉霉素 (ACM) 以无血清 RPMI一1640补足 ，细胞终浓度为 1×10 对其影响，现报告如下。 个 ／ml，每孔总体系0．2ml，分别处理 24，36，72小 时，加 MTT(终浓度 0．5mg／m1)，置 37℃，5 CO l 材料和方法 培养箱中孵育 4小时，离心，弃上清 ，加入二 甲亚砜 1．1 细胞株及细胞培养 MUTZ一1细胞株由德国 0．2ml，吹打混匀。用酶标仪 (DG一3022A型 ，华东 电 Braunschwei细胞库引进。建株于一5岁女性 MDS 子管厂)在 570Jim波长处读取吸光度值 (A)。以时 (FAB分类属RAEB)患儿外周血[]]。采用常规培 间为横轴，A值为纵轴，绘制细胞生长曲线 半数抑 养，在含体积分数 1O 胎牛血清 (FBS)的RPMI一 制浓度 (IC )采用Logit法计算。实验重复 3次，设 1640培养液 (Gibco)、37℃、体积分数 5 CO2、饱和 复孔三个，取平均值为最终结果。 湿度 CO。培养箱中培养，3～4天换液传代一次 。试 1．4 细胞形态观察 收集经ACM 处理后的细胞 验时所用细胞均为对数生长期 。 适量，涂片凉干，瑞 氏一吉姆萨染色，光镜下观察并拍 1．2 主要试剂 ACM 为扬州制药厂产品；四甲基 照 。 偶氮唑蓝 (MTT)购 自Sigma公司；膜连蛋 白V 1．5 DNA抽提及琼脂糖凝胶电泳 0．1～0．5 (AnnexinV)FITC细胞凋亡检测试剂盒为北京宝 molACM