蛋白质光谱探针研究进展.PDF

前16卷第5剐 河北师范大学学报(甘然科学皈) Vol2sNo．5 rnal。f}kbelNormal Scl㈣e 2002年9月 JoLl Universltv(NaturalEd…。n) Sep，2(102 蛋白质光谱探针研究进展 张玉平，魏永巨 (河北师范大学化学学院，河北石家庄05。091) 摘 要：蛋白质分析是生命科学研究中的重要课题．蛋白质内源紫外吸收光谱和荧光光谱可以用于蛋白 质分析，但其灵敏度不能满足微量分析的要求．蛋白质光谱探针(包括金属离子、有机试剂和金属络合物)能够 与蛋白质相互作用生成超分子复合物并引起体系光谱信号的变化，由此可以提供蛋白质含量或结构方面的 信息．根据光分析方法的不同，蛋白质光谱探针可队分为吸光探针、荧光探针和光散射探针3类．本文中，笔者 综述了蛋白质光谱探针的研究进展，讨论了发展趋势． 关键词：蛋白质；分光光度法l荧光；光散射；评述 中图分类号：O657．3 文献标识码：A 文章编号：looo一5854(2002)05一050l—os 蛋白质含有色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸残基，故在紫外光区有吸收，并且在340～350nm有荧光发 射，因此可以用蛋白质的紫外吸收或荧光光谱进行定量分析．对微量分析而言，蛋自质内源光谱在灵敏 度方面常常不能满足需要，为此，人们发展了各种光谱探针分析方法．所谓蛋白质光谱探针，就是能与蛋 白质发生相互作用的无机离子、有机小分子或络合物，这些物质与蛋白质结合生成超分子复台物之后， 体系的光谱性质发生变化，从而可以提供蛋白质浓度或结构方面的信息． I蛋白质吸光探针 1．1金属探针 双缩脲法(BIuret assay)是一种测定蛋白质的经典方法．双缩脲反应是双缩脲在碱性溶液中与铜离 子(cu”)生成紫红色化合物的反应．具有2个或2个以上肽键的化合物皆有双缩脲反应，因此蛋白质在 缩脲试剂和F01tn一酚试剂(磷钼酸盐一磷钨酸盐)结合使用，在蛋白质发生双缩脲反应之后，再和F。lin ～酚试剂反应，此试剂在碱性条件下易被蛋白质中酪氨酸的酚基还原，呈蓝色反应，由此生成颜色更深 的化台物．可在640nm测量吸光度．劳里法较双缩脲法灵敏100倍，其不足之处是此反应受多种因素干 扰，且由于蛋白质中酪氨酸、色氨酸含量不同，在显色灵敏度方面存在差异”]． h[3 1985年，smit3等提出了二喹啉甲酸(Bicinchoninic acid，又称双辛可宁酸)法，简称BcA法，其反 色络合物，在565 nm测量吸光度．BcA法的试剂比劳里法的试剂稳定，干扰少．各种蛋白质之间显色差 异小，故这种方法逐渐被采用． Krystapl等于】985年发展了银染色法测定微量蛋白质的方法．该法先用甘油醛处理蛋白质样品， 再与银氨溶液混合，10min后加入硫代硫酸钠终止反应，测定420nm吸光度．该法的线性范围为15ng ～2pg．胶体金属，如金、银也与蛋白质作用，已被用来测定微量蛋白质”“1．胶体金的测定波长为 590 nm，可以测定20“g的蛋白质． 收樯日期：2001一ll—06l修回日期：2002一01一07 基金项目：河北省自然科学基盘资助项目(200153)；河北省教育厅博士基金资助项目 976)．女．河北车润』、，河北师范大学硕士研究生． 作者简升：张玉甲(1 万方数据 502 河北师范大学学报(自然科学版) 第26卷 1．2染料探针 染料探针是蛋白质分析中种类最多、应用最广的一类探针．此类探针按分子结构可分为三苯甲烷 类、偶氮类、偶氮变色酸类和卟啉类等． 1．2．1三苯甲烷类探针溴酚蓝”…是一种研究较早、性能优良的探针试剂．该试剂颜色对比度为 160 nm，反应在pH3．2左右进行，在600