热变性法提纯猪血SOD的工艺优化.pdfVIP

第27卷第1期 武 汉 工 业 学 院 学 报 VoL 27No．1 2008年3月 Journal of Wuhan Polytechnic University Mal-．20o8 文章编号：1009—4881(2008)01—0008—03 热变性法提纯猪血SOD的工艺优化 刘晓红，李向东，刘婷，周帼萍 (武汉工业学院生物与制药工程系，湖北武汉430023) 摘 要：在热变性法提取猪血中SOD工艺中，比较了Cu“和zn“对SOD的保护作用和沉淀 杂蛋白的作用，试验表明：这两种离子的硫酸盐对SOD的保护效应要优于氯盐；当Cu“和 Zn一浓度分别为2mmol／L和3mmol／L共同作用时对SOD的保护效果最好，SOD比活力比空 白对照组的提高了78．4％，杂蛋白沉淀量也提高了21．2％；而在这个Cu“和zn“浓度下，热 变性温度65℃时，SOD的比活力最高，杂蛋白的沉淀效果也较好。 关键词：猪血；SOD；热变性法 中图分类号：TS 209 文献标识码：A 1．3 主要实验仪器与设备 0 引言 pHS一3C数字酸度计；磁力加热搅拌器；WFJ7200 超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase)，简称 型可见分光光度计一 尤尼科(上海)仪器有限公司； SOD，是一种广泛存在于好氧微生物和动植物中的 Nikon显微镜(YS100)；离心机；电子天平。 金属酶。它能够清除超氧阴离子自由基(O ．)，从 1．4 实验方法 而有效地防御活性氧对生物体的毒害作用，增强机 1．4．1 SOD活力的测定方法 体抗辐射损伤能力，并可以预防衰老，在某些疾病的 邻苯三酚自氧化速率法 删测定酶活力，酶活 治疗中有良好的疗效。现在SOD已用于化妆品、食 力按以下公式进行计算： 品和医药领域。目前已开发和正在开发的SOD资 xlO0％ 源有动物血液、刺梨、麦叶、果蔬及微生物等。动物 删 ： 血液是国内外正在生产SOD的主要资源，国外最常 ×反应液总体积 用的是牛、羊的血液，国内则因为猪血资源丰富所以 、 ， 样液稀释倍数 更常用猪血” 。 样液体积 1 材料与方法 酶活力单位定义：在25℃恒温条件下，每毫升 反应液中，每分钟抑制邻苯三酚自氧化速率达50％ 1．1 材料来源 新鲜猪血经抗凝(柠檬酸钠)处 的酶量定义为一个酶活力单位。 理、冻融搅拌后的溶血液，显微镜镜检显示其红细胞 1，4．2 对铜锌盐类的选择 的溶血率90％。 分别向溶血液中加入硫酸铜、氯化铜、硫酸锌和氯 1．2 试剂 化锌4种盐，其浓度均为3mmol／L，经60℃保温处理 邻苯三酚(分析纯)；硫酸铜、硫酸锌、氯化铜、 10min后，12 000r／min离心5min，检测上清