用Rnase Ⅲ制备的小干涉RNA降解SARS冠状病毒基因的细胞内转录物.pdfVIP

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2017-08-25 发布于湖北
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用Rnase Ⅲ制备的小干涉RNA降解SARS冠状病毒基因的细胞内转录物.pdf

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用Rnase Ⅲ制备的小干涉RNA降解SARS冠状病毒基因的细胞内转录物

卷期生物工程学报 ! # %’ (! ) (# 年月 !# $ !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 *+’, !# !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 用!#$% !制备的小干涉! 降解 ’!’ 冠状病毒基因的细胞内转录物朱旭东党颖冯怡李涛黄培堂（北京生物工程研究所，北京 .$.）摘要 EFGE 冠状病毒是引起重症急性呼吸综合症的主要原因，目前尚没有特效药物或疫苗对抗这种新病毒。干涉是指双链可以特异地降解细胞内同源基因的。在哺乳动物细胞中，的小双链能 G)F G)F G)F H 1IJ G)F 引起干涉，又可以避免干扰素反应。通过体外转录得到病毒种基因依赖的聚合酶、刺突蛋 G)F EFGE 1 G)F G)F 白及核衣壳蛋白部分片段的长双链，然后用有限切割成长度的小干涉。同时把上述种 G)F G)9K5 ! H 1IJ G)F 1 基因片段分别连接到质粒中，得到的个质粒、和可以分别在细胞内转录出荧光素 JLM1-2CDN’ 1 JLM-G JLM-E JLM-) 酶依赖的聚合酶、刺突蛋白、核衣壳蛋白的杂合。上述质粒分别和相应的小干涉共转染 -G)F G)F - - G)F G)F O;P!018 细胞，测定荧光素酶活性，结果小干涉G)F 使相应质粒表达荧光素酶的活性显著下降；用逆转录定量Q2G 反应测量G)F 丰度，结果表明上述小干涉G)F 可以特异地降解相应的病毒基因转录物。关键词冠状病毒，干涉，依赖的聚合酶，刺突蛋白，核衣壳蛋白 EFGE G)F G)F G)F 中图分类号，文献标识码文章编号（） R60 G1$1 F .-17. !# #-#6#-7 冠状病毒（，）已得到的称为“核酸内切酶制备的 ” EFGE EFGE SNC9T=N+K EFGE-2T G)F K=G)F K=G)F ［］