肠出血性大肠埃希菌O157∶H7环介导恒温扩增快速检测方法的建立与应用.pdfVIP

618 中 国 人 兽 共 患 病 学 报 ChineseJournalofZoonoses 2010，26 (7) 文章编号 ：1002—2694(2O10)07—0618—06 肠出血性大肠埃希菌O157：H7环介导恒温扩增 快速检测方法的建立与应用* 徐义刚 ，崔丽春 ，李苏龙 ，于恒纯 ，李丹丹。，谢晓峰 ，姜艳春 摘 要 ：目的 肠 出血性大肠埃希菌 (EnterohemorrhagicEscherichiacoli，EHEC)0157：H7是一种重要 的人畜共患病 致病菌，主要通过被污染的食物传播 ，引起 出血性结肠炎，建立其快速检测方法具有重要意义 。方法 基于 EHECO157：H7 保守的rfbE基 因序列，设计4条引物 ，利用环介导等温扩增技术(1oop—mediatedisothermalamplification，LAMP)，成功建立 了 EHECO157：H7LAMP快速检测方法 ，60rain内即可完成致病菌检测。结果 利用该 LAMP方法对 3O种共 38株细菌进 行检测 ，所试 EHEcO157：H7均为阳性结果，说明该方法具有高度特异性 。本方法对纯培养的EHECO157：H7检测限为 12CFU／mL，污染食品中EHECO157：H7的检测限为18CFU／g。实践应用表 明，对 1121份进 出口肉类、奶类制 品及人工 污染样 品等进行检测，检 出57份LAMP阳性，与采用 AOAC标准检测结果的符合率为 100 。结论 该 LAMP方法操作简 便 、特异性强、灵敏度高，具有 良好 的实用性。 关键词 ：肠 出血性大肠埃希菌 O157：H7；rfbE基 因；环介导恒温扩增；快速检测 中图分类号 ：R3782 文献标识码 ：A EstablishmentofrapidmethodfordetectingenterohemorrhagicE．coli O157 ：H7by loop-mediatedisothermalamplification xu Yi—gang ，CUILi—chune，LISu-long ，YU Heng-chun ，LIDan-dan。，XIEXiao-feng，JIANG Yan-chun (1．TechnicalCentreofHeilongJiangEntry—exitInspectionandQuarantineBureau，Harbin150001，China； 2．NortheastForestryUniversity，Harbin150040，China；3．TechnicalCentreofHainan Entry-exitInspectionandQuarantineBureau，Haikou570125，China) ABSTRACT：EnterohemorrhagicE．coli (EHEC)O157：H7 isan importantpathogenofzoonose，mainly initiatesits transmissionthrough contaminatedfood and causeshemorrhagiccolitis．Thus，developmentofrapid methodfordetecting EHECO157：H7isofgreatimportance．AccordingtohighlyconservedrfbEgeneofEHECO157：H7，fourprimerswere designed，thenthemethodfordetectingEHEC O157 ：H7wasestablishedbyDNA loop—mediatedisothermalamplification (LAMP)，whichcouldfinish thetestin60min． Thirty—eightbacteriastrainsweretested by theLAMP method and only EHEC O157：H7strainswereLAMPpositiveresults。indicatingthehighspecificityofth