腺病毒穿梭质粒pShuttle CMV-BMP2^+-IRES-hrGFP-1的构建和鉴定.pdfVIP

维普资讯 锦州臣学院学报 2005J~ ． ． JJinzhouMedCollege ’’26(3) 1 腺病毒穿梭质粒 pShuttleCMV—BMP2+ 一 IRES—hrGFP一1的构建和鉴定 张 正，刘丹平 ，蒲 勤2，郭 韬 ，张 男 (1．锦州医学院附属第一医院骨科，辽宁 锦州 121000；2．第四军医大学生化教研室 ，陕西 西安 710032) 摘【要】目的 构建腺病毒穿梭质粒pShuttleCMV—BMP2 一IRES—hrGFP一1，为构建表达具有抗原表位标记 的骨形态发生蛋 白2 (bonemorphogeneticprotein2，BMP一2)，并 同时表达绿色荧光蛋 白 (greenfluorescent pmteln。GFP)报告分子的腺病毒真核细胞表达载体打下基础。方法 对 目的基因供体质粒 peDNA3一BMP2携 带的BMP2基因测序和序列 内部存在的限制性内切酶识别位点进行分析，利用 PCR ( yTneraschainreaction， PCR)技术对peDNA3一BMP2携带的BMP2基因突变 ，以去除翻译终止密码子后的基因序列并添加新的酶切识 别位点XhoI。测序检测突变情况，将 突变后 的 BMP2基 因 (BMP2 基 因)定 向连入腺病毒 穿梭质粒 pShuttleCMV—IRES—hrGFP一1，通过限制性内切酶酶切图谱分析鉴定获得的重组质粒。结果 重组质粒经双 酶切鉴定图谱正确。结论 成功构建了pShuttleCMV-BMP2一IRES-hrGFP一1。 关【键词】 腺病毒穿梭载体；骨形态发生蛋白2(BMP一2) 【中图分类号】 R373 文【献标识码】 A 文【章编号】 1000—5161(2005)03—0001—05 ConstructionandIdentificationofRecombinantAdenovirus ShuttlePlasimidpShuttleCMV—BMP2+一IRES—GFP一1 ZHANGZheng，LIU Dan—ping，PU Qin，GUOTao，ZHANGNna (DepartmentofOrthopaedics，JinzhouMdeicalCollege，Jinzhou121000China) A【bstract】 Objective Toclonebonemorphogeneticprotein2(BMP2)geneintotheadenovirus shuttleplasmid pShuttleCM、LIRF_~-hrC P一1preparing forconstruction ofanovelrecombinnat adenovirusvectorexpressingtheBlVIP2fusedtoFLAGepitopenadgreenfluorescentprotein (GFP)aS areporteronthe8alTletrna script．Methods TheB geneocntainedintheplasimidofpcDNA3一 BMP2Was sequenced，nadtheprofileofrestrictionendonucleasesites existingin thesequenceWas naalysed，thenthebasepairsbehindthetranslationstopcodonTAGwereremovde nadaXhoI restrictionsiteWasadddefollowingthe3’endofthemutnatthroughpolymeraschainreaction(PCR) mut~enesistcehnology．Afterbe