细胞生物学15程序性细胞死亡与细胞衰老.pptVIP

二、体外培养细胞的衰老与Hayflick界限 Hayflick等人的研究证实：关于细胞增殖能力和寿命是有限的观点。细胞，至少是培养的细胞，不是不死的，而是有一定的寿命；细胞的增殖能力不是无限的，而是有一定的界限，这就是著名的Hayflick界限。 他们的工作是对细胞“不死性”学说的彻底否定。研究发现，物种寿命与培养细胞之间存在着正相关的关系，即寿命愈长，其培养细胞的传代次数愈多。反之，其培养细胞的传代次数愈少。 癌细胞或培养的细胞系是不正常细胞，其染色体数目或形态已经不同于原先的细胞。 细胞的增殖能力与供体年龄有关。 物种寿命与培养细胞寿命之间存在着一定的关系。 2-4 20 40-60 可增殖代数 老年人成 纤维细胞 中年人成 纤维细胞 人胚肺成纤维细胞 细胞来源 不同年龄来源的人成纤维细胞的增殖代数 由体外培养不同物种的胚胎成纤维细胞，可见： 　　小鼠细胞可传12代，而其个体寿命约3年； 　　小鸡细胞可传25代，其个体寿命近30年； 　　龟细胞可传140代，其个体寿命约200年。 * 机体结构 细胞增殖 细胞分化 细胞凋亡 细胞信号转导 染色体 （DNA与蛋白质的相互作用） 衰老 第十三章 程序性细胞死亡与细胞衰老 第一节 程序性细胞死亡 一、动物细胞的程序性死亡 ㈠细胞凋亡 ⒈概念和特征 　由基因决定的主动结束生命的过程。由于细胞凋亡受到严格的由遗传机制决定的程序性调控。它普遍地存在于动物和植物中。 2002年10月7日英国人悉尼·布雷诺尔、美国人罗伯特·霍维茨和英国人约翰·苏尔斯顿，因在器官发育的遗传调控和细胞程序性死亡方面的研究，获诺贝尔生理与医学奖。 1090 –131= 959(cells) 脊椎动物的神经系统的发育 蝌蚪尾的消失 发育过程中手的成形过程 B为敲除了细胞凋亡的基因，小鼠发育不正常，死亡。 细胞凋亡的特征： 　 ①细胞首先变圆，与邻近细胞脱离。 　 ②染色质固缩，分离沿核膜分布，细胞质也发生固缩。 　 ③DNA在核小体连接区被酶降解为片段。 　 ④细胞膜反折，包围细胞碎片，形成芽状突起脱落后形成凋亡小体或细胞固缩形成凋亡小体。 　 ⑤凋亡小体被周围细胞吞噬，无细胞内容物外泄，故无炎症反应。 凋亡细胞的形态变化 细胞凋亡的形态学特征 在细胞凋亡过程中，形态结构发生了明显的变化。 ⒈凋亡的起始 ⒉凋亡小体形成 ⒊凋亡小体逐渐为邻近的细胞吞噬 ⒉细胞凋亡的生理意义 在有机体生长发育过程中具有极其重要的意义。 ①细胞调亡是维持个体正常生理过程所必需的。如在生理条件下，许多退化过程都与之相关，象断奶后乳房恢复静息状态；许多昆虫，两栖类动物发育过程中的变态现象等。 ②抵御外界各种因素的干扰。已衰老或病变的细胞发生凋亡而被清除，这对于维持体内细胞的新陈代谢有重要意义。 ⒊细胞凋亡的检测 ⑴形态上判断（显微镜观察） 　　荧光素染色法：用荧光染料DAPI染色可观察到细胞核的形态变化 　　有无凋亡小体 　　有无炎症反应 　　核周边有无半圆形或三角形的凝聚块。 　 ⑵DNA电泳 电泳结果有无“梯状”条带（DNA ladders) ⑶TUNEL测定法（末端标记法） DNA分子断裂缺口中的3’-OH进行原位标记。 ⑷慧星电泳法 DNA降解片段电泳速度快。 ⑸流式细胞分析 　检测DNA含量的变化是否介 于二倍体和多倍体之间。 DNA电泳 （生化特征） 细胞凋亡的最主要特征是DNA发生核小体间的断裂，结果产生数量不同的核小体片段，在进行琼脂糖凝胶电游泳时，形成特征性DNA梯状条带。 DNA电泳形成的梯状条带是细胞凋亡的典型特征，到目前为止，梯状条带仍是鉴定细胞凋亡最可靠的方法。 病毒诱导细胞凋亡 ㈡细胞坏死 ⒈定义　　 细胞坏死(necrosis) ：是极端的物理、化学因素或严重的病理性刺激（如局部缺血、高热及物理化学损伤和微生物的侵袭等）引起的细胞损伤和死亡。 　　　 ⒉坏死的特征： 　　①细胞膜通透性增加，细胞外形变得规则。 　　②细胞核及线粒体肿胀，内质网扩张，溶酶体破裂，最终细胞膜破坏，胞浆外溢，细胞解体，引起炎症反应。 坏死细胞的形态变化 过去认为，细胞坏死是一种被动的死亡方式。现在认为可能是细胞程序性死亡的另一种形式。 细胞坏死与凋亡的形态区别 　图　 左，正常胸腺细胞；右，凋亡胸腺细胞（注意凋亡小体） ⒊细胞坏死和细胞凋亡的区别 有，释放内容 无，不释放细胞内容物 炎症反应 被动进行 受基因调控 调节过程 无 有 蛋白质合成 随机降解，电泳图