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　　53例多发性骨髓瘤细胞遗传学研究 　　多发性骨髓瘤（muMPlemye]on，aMM堤多发于中老年人浆细胞异常增生的恶性肿瘤，其发病机制尚不清楚，病程发展及预后差异大，常规化疗不能治愈，生存期从几天至十几年不等。近年来细胞遗传学的发展推动了MM的细胞遗传学研究。有研究认为，几乎所有的MM患者都存在染色体异常， 　　但由于骨髓中瘤细胞的数量不等，骨髓瘤细胞的增 　　殖率较低，复杂核型染色体质量较差而难以分析等原因，以常规细胞遗传学方法（CC)检测MM患者克隆性染色体异常的检出率只有20%-50%1]，而分子细胞遗传学的发展，尤其是FSH技术的应用，克服了CC的缺点，提高了染色体异常的检出率，极大地推动了MM的细胞遗传学研究。本研究对53例MM患者进行常规细胞遗传学检测，并采用5种探针对其中20例MM进行FEH分析，研究MM细胞遗传学特点。 　　材料和方法 　　研究对象 　　53例MM为2004年3月至2009年12月在大连医 　　科大学附属第一医院门诊及住院的患者，其中男29例，女24例，年龄34-81岁，中位年龄60岁。MM的诊断系根据患者的临床表现、细胞形态学或骨髓活检，免疫球蛋白结果，诊断符合〈(血液病诊断及疗效标准》。正常对照组为20例正常人的骨髓标本。 　　常规细胞遗传学分析 　　全部病例均采用不加任何刺激剂的骨髓细胞短期培养法，收获前1小时加秋水仙胺（Sgma公司产品）低渗35分钟，固定液（甲醇冰乙酸=3:1)固定3次，细胞悬液制片，R显带姬姆萨染色后进行核型分析。核型描述按照《人类细胞遗传学国际命名体制(B2005)》。 　　荧光原位杂交（FISH)检测探针采用北京金菩嘉医疗科技有限公司的探针试剂盒，包含5种探针表1)其中GLP1嗲1探针检测基因扩增，正常细胞为2个红色（R)言号，阳性细胞为3个或3个以上红色信号（附图A)GLPD13S319探针检测基因缺失，正常细胞为2个红色(R)信号，阳性细胞为1个或无红色信号（附图B)GLPRB1和GLPp3探针均检测基因缺失，正常细胞为2个绿色（G)信号，阳性细胞为1个或无绿色信号（附图Q;GLPGH探针检测易位正常细胞为2个黄色（Y)信号，阳性细胞为1个黄色1个红色1个绿色信号或2个红色2个绿色信号（附图D) 　　FEH操作步骤R显带后剩余细胞冻存于一20°C冰箱中。临用前用新鲜固定液洗3次，滴片后气干。玻片在预温过的37°C2XSSC中处理1小时，取出梯度乙醇（70%、85%.100%)脱水，气干。玻片在预温过的73°C、70%甲酰胺/2XSC变性液中变性5分钟，变性后取出梯度乙醇脱水，气干。将按照试剂说明书配好的探针在73°C水浴变性5分钟后立即取出滴加在变性后气干的玻片上，盖上盖玻片，并用玻片胶封好四周，于37C湿盒内杂交6-16小时，快速洗脱样本每个样本加入DAPH及抗萃灭剂（vyi混合液10!上1后,盖上盖玻片，于暗室中复染30-60分钟。 　　采集在DAPI/FTC/TRTC3色滤光镜激发下的间期细胞荧光信号，并用CANON全自动数码照相机照相，图像传输入计算机处理。每例标本每种探针分析200-500个间期细胞，计算阳性率。 　　统计学处理 　　FHH数据用X±3?表示，经SPSS1Q0统计软件分析。20例正常人骨髓标本经FSH分析得出正常值范围（X±393)(表2)所有病例阳性率以大于正常值上限（X+33，染色体众数从44条到90条不等。染色体核型异常涉及所有24条染色体，其中涉及1(21扩增、13(4缺失，17P3缺失及14(2易位中至少1种染色体异常的占70.6%(12/17)其中涉及1(1扩增的占1L8%(2/17)涉及13(4缺失的占41.3%(7/17)涉及17P3缺失的占11.8%(2/17)涉及14(2易位的占17.7%(3/17)包括lt;814)((4(2)在这些患者中涉及2种染色体异常的有2例，1例为1(1扩增伴14(2易位，1例为13(4缺失伴171P3缺失;在所有染色体核型异常的患者中，还发现了一些不常见的结构异常，如t(1116)(U吒3)、（1;2)(巧3(3)叫22)((4?(1)de(5)(P0)i(6)(P0)der(12)((10(10)等;还有一些在急慢性白血病中经常见到的异常，如del(20)((1)、(922)((4(1)等。同时很多病例可见到1条至多条不等的标记染色体（makeralaloan，ema) 　　FISH检测分析 　　从53例MM患者中选择2008年门诊及入院患者20例，采用5种探针分别对其进行FIH检测。12例染色体核型正常的患者中有3例FIJH检测阳性，其中1〔21阳性1例，EH阳性1例，还有1例1〔21和RB1均阳性；8例染色体核型异常的患者中有5例FEH检测阳性，其中例19KH阳性，例251