清心开窍方对老年性痴呆模型大鼠学习记忆能力影响探究.doc

清心开窍方对老年性痴呆模型大鼠学习记忆能力影响探究摘要 目的：探讨AJ31―40对大鼠学习记忆能力的影响及清心开窍方的防治作用。方法：将Aβ1―40注入大鼠双侧海马建立老年性痴呆动物模型，动物实验采用对照观察法。治疗组与预防组用清心开窍方防治，对照组用双益平治疗，疗程结束后评定疗效，检测脑组织中海马区ChaT、Ache活性。结果：预防组和治疗组大鼠的学习记忆能力改善显著高于模型组(P0.05)。脑内海马区ChaT和AchE活性，模型组ChaT活性显著降低，预防组和治疗组的ChaT活性升高，差异有显著性意义(P0.05)。结论：清心开窍方对Aβ1―40所致老年性痴呆大鼠模型具有预防和治疗作用。 关键词 老年性痴呆 学习记忆能力 清心开窍方 实验研究 老年性痴呆(简称AD)是老年人的常见病、多发病。其首要症状是智力、记忆力、感官定向能力、判断力、语言思维能力不可逆的进行性退化，并常伴有性格改变。该病的发病率随年龄增长而增加，65岁以上的老年人口中约占5％，75岁以上的老年人中则上升为20％。AD目前已成为继心脏病、肿瘤和中风之后的第四位死亡原因，由于其发病的隐匿性和不可逆性，给家庭和社会带来很大负担与危害。清心开窍方已运用临床多年，疗效确定。现将其对AD模型大鼠学习记忆能力和脑组织ChaT和AchE活性的影响总结如下。 1、材料 1.1 动物：SD雄性大鼠80只，清洁级，体重90～115g，购自中国科学院上海实验动物中心。购后饲养在屏障系统内。饲养条件：温度控制在20～25℃，湿度40％～70％。光照12小时明，12小时暗，饲以60钻辐照全价营养颗粒饲料和高压灭菌水，垫料每周更换两次。 1.2 药物与试剂：分述如下。 1.2.1　药物：清心开窍方汤剂药物组成：生地、麦冬、白芍、石菖蒲、丹皮、茯神、苦参各6g，陈皮4g，知母5g等，制成含生药浓度为0.91g/ml药液。用真空塑料袋包装，储存于4℃冷藏室，灌胃剂量为8.7ml/kg。双益平：50μg/片，上海复旦复华药业有限公司生产，批号为：051001，用前配制，浓度为：3.5μg/ml，灌胃剂量为10ml/kg。Aβ1―40：500μg/瓶，Sigma公司生产，产品号：A1075，批号为：104K4771。用前加200μl注射用水溶解，浓度为2.5μg/μl，置于37℃恒温水槽中孵育1周。 1.2.2　试剂：乙酰胆碱酯酶(AchE)测试盒、乙酰胆碱转移酶(ChaT)测试盒购自南京建成生物工程研究所。 1.3　主要仪器：水迷宫设备：Morris水迷宫视频分析系统(上海吉量软件科技有限公司生产)，通过电脑同步记录大鼠运动轨迹。图象处理系统为DigBehv动物行为分析系统。训练期间迷宫外参照物保持不变。722型分光光度计(上海第三分析仪器厂生产)。5417R离心机(德国EPPENDORF公司生产)。 2、方法 2.1 动物分组及造模：SD雄性大鼠80只，体重90～115g。动物购来后秤重，随机分为正常对照组、假手术组、模型组、阳性治疗组、预防组和治疗组6组，每组10只。具体处理如下：①正常对照组：正常饲喂2周后，用生理盐水灌胃3周；②假手术组：正常饲喂2周后，双侧脑内注射灭菌注射用水，再用生理盐水灌胃3周；③模型组：正常饲喂2周后，双侧脑内注射Aβ1―40，再用生理盐水灌胃3周；④阳性治疗组：正常饲喂2周后，双侧脑内注射Aβ1―40，再用双益平(10ml/kg/d)灌胃3周。⑤预防组：正常饲喂同时用清心凉血开窍方灌胃给药，2周后，双侧脑内注射Aβ1―40，再用清心凉血开窍方灌胃给药3周；⑥治疗组：正常饲喂2周后，双侧脑内注射A131―40，再用清心凉血开窍方灌胃给药3周。 双侧脑内注射法：双侧脑内注射用由第二军医大学生理教研室研制的江湾I型C脑立体定位仪。左右海马定位P3.0mm，L2.0mm，H3.0mm。氯胺酮(0.1～0.2ml/100g)腹腔麻醉，用立体定向仪固定头部，酒精棉球局部消毒，剪开头顶皮肤，暴露头骨，经初步定位后，用骨钻钻开头骨，于前囟后3.0mm，左右旁开2.0mm进针，深3.0mm缓慢注入2μ Aβ1―40，双侧共4μl，5min内注射完毕，留针5min后缓慢退出(正常对照组不注射，假手术组注射等量的灭菌用注射用水)，缝合头皮，最后肌肉注射青霉素，操作完毕后将其放回笼盒，注意观察麻醉未醒的大鼠，防止其窒息死亡。 2.2　观测指标：分述如下。 2.2.1 水迷宫试验：全部给药结束后开始水迷宫测试。训练时选择一个入水点，将大鼠面向池壁放入水中，图象处理系统将观察并记录大鼠在水中游泳寻找并爬上平台的路线图、所需时间(即大鼠找到平台所需时间)。设定最长游动时限为70秒，如果大鼠在70s内未找到平