硫酸软骨素生产工艺探究进展.docVIP

硫酸软骨素生产工艺探究进展摘　要：参考近年文献，结合个人实践经验，综述硫酸软骨素生产工艺的研究进展。并对硫酸软骨素的生产工艺进行综合讨论。 关键词：硫酸软骨素；生产；工艺 中图分类号：Q539.7　文献标识码：A　文章编号：1672-979X(2010)11-0381-04 1　几种典型生产工艺及其讨论 1.1　以鲨软骨为原料的一种传统常见工艺 软骨原料1000g，5～8cm，在pH 8.5氢氧化钠溶液5000mL中水解，加氯化钠150g，60℃3h，溶液用6mol／L盐酸调pH 6.0，离心除去固体。上清液用氢氧化钠调pH8.5，加胰来源的酶千分之五水解，53℃3h，65℃酸化溶液至pH6.0终止酶解，室温离心10min除去不溶部分。上清液用2倍体积乙醇沉淀30min。沉积物室温下用乙醇脱水6h。残留乙醇80℃10h除去，得硫酸软骨素钠。 此工艺首先用碱水解，即化学水解，在氯化钠存在下进行，以使硫酸软骨素等糖胺聚糖与其核心蛋白分离，所用碱的浓度不高。溶液调pH6.0，可使部分蛋白质或肽沉淀分离，然后再以酶解进一步除去蛋白质或肽，最后用乙醇沉淀法分离纯化。不过，原料为鲨软骨，用其他动物胰来源的酶则不一定妥当。 此工艺用于生产，基本上可行，但产品纯度可能不高。 1.2　以鲨软骨为原料的无溶剂力化学提取方法 鲨软骨与水80℃处理10min，80℃6h烘干后粉碎成粉末。氢氧化钠与二氧化硅在研磨器中研磨1rain得固体碱试剂。碱试剂与软骨细粉共研磨3min。所得混合物溶于3％氯化钠溶液，调pH6.0，离心。上清液乙醇沉淀得产品。此法所得硫酸软骨素产品收率可从1.1所述传统工艺的8.5％增加到9.3％，纯度可从86％提高到95％。提取时间从3h缩短至3min，能量消耗减少。 上述实验系小规模制备，如工业生产规模则不能充分显现此法的优势。况且碱试剂实际上会有水分，软骨原料也会含水分，所以称为无溶剂提取需要探讨。此实验可给以启发，即强浓碱处理是可行的，可提高收率。此法明显减少氢氧化钠的用量，用较少的碱即可达到高浓度。 1.3　以鱼软骨为原料的一种酶解，活性炭吸附等工艺 鱼软骨45℃水洗涤，碱性条件下加蛋白酶(0.1％，w／v)，55℃3h，95℃5min使酶失活。提取液pH6条件下加活性炭(0.3％，w／v)，55℃1h吸附蛋白质或肽等杂质。加氢氧化钠调pH至6，压滤。滤液低温下加乙醇(60％，v／v)沉淀。将沉淀溶解或悬浮于水，阳离子交换层析进一步去除杂质。浓缩至原体积的30％，喷雾干燥得产品。此方法的研究者认为，工艺成本较低，周期较短，是膜超滤或透滤纯化方法的改进；部分过程可连续进行，产品质量较高。 此方法的成功与否，酶和活性炭的选用和具体操作很重要。在硫酸软骨素的生产中，还可采用硅藻土、高岭土等吸附剂，使用这类吸附剂的过程，溶液的pH值和吸附剂的预处理、用量很重要。而且这些条件都不是固定的，与原料、工艺以及吸附剂的型号甚至批次有关。阳离子交换剂可采用强酸性孔径较大的树脂，吸附效果很重要。如果此工艺的各个纯化过程都很有效，则最后浓缩后喷雾干燥可望得到纯度较高的产品。 1.4　以鲟鱼骨为原料的一种季铵盐纯化等工艺“ 鲟软骨和骨洗涤、干燥和粉碎，置于含碱性蛋白酶(5％)的50mmol／L碳酸钠缓冲液中，60℃保温12h，加热使沸10min灭活蛋白酶，过滤并冷却至4℃。滤液加6.1mol／L三氯醋酸溶液使其浓度为5％(v／v)，蛋白质沉淀在4℃离心除去。溶液加乙醇至80％(v／v)沉淀，4℃离心分离。沉淀溶于水，与氯化十六烷基吡啶混合终达1％(w／v)，室温1h，4℃离心收集沉淀。沉淀溶于2.5mol／L氯化钠，乙醇再沉淀(80％，v／v)，4℃离心。最后的沉淀再溶于水，4℃透析(截留相对分子质量M6×103～8×103)2d，冻干得产品。从鲟软骨制得的产品主要含硫酸软骨索A(88.8％)，而从鲟脊柱制得的产品含硫酸软骨素c在60％以上，两者的M分别为8×103和43×103。 此方法几乎使用了所有的纯化方法，而且有过程重复使用，主要目的是为了得到纯品，以进一步开展其表征和生物活性研究。作为实验室制备少量产品可行，但不适于工业化生产。虽然如此，其多种纯化过程可供生产参考。季铵盐法分离糖胺聚糖适于价格较高的产品，如透明质酸。肝素钠目前多采用离子交换法与其他糖胺聚糖等分离。随着肝素钠价格的升高，也可考虑使用季铵盐法。 1.5　以缸鱼软骨为原料的一种超滤纯化工艺 舡软骨破碎后按其干重60kg／m3置于水中，加入一种粗品木瓜蛋白酶，于pH 6.5和65℃水解3h，离心除去不溶物。水解液干重42kg，其中硫酸软骨素13kg，肽19kg，盐相当于氯