葡糖异构酶菌株筛选及固定化探究.docVIP

葡糖异构酶菌株筛选及固定化探究摘要：目的筛选高产葡糖异构酶的嗜热放线菌优良菌种，并将其固定化。方法分离、诱变育种筛选出高产葡糖异构酶放线菌优良菌种，用离子交换树脂作载体进行葡糖异构酶固定化的研究。结果筛选出葡糖异构酶放线菌高产优良菌种，用离子交换树脂进行葡糖异构酶的固定化，其固定化酶活性为18 000～20 000 U/g（干）。结论筛选到葡糖异构酶放线菌高产优良菌种，用离子交换树脂作载体进行固定化，所得到的葡糖异构酶酶活性较高。 关键词：葡糖异构酶；固定化；离子交换树脂 中图分类号：Q814文章标识码：A文章编号：1672-979X(2007)01-0005-04 Study on Screening of High-producing Glucose Isomerase strains and Immobilization YUAN Jian-guo1, LI Feng2, XU Jun-qing2, TIAN Xue-wen2, DUAN Feng2, YANG Dan2 (1. Shandong Academy of Food Fermentation Industries, Jinan 250013, China; 2. The Research and Design Center of Jinglu Bio-technology of Jinan, Jinan 250013, China) Abstract: Objective To select high-producing glucose isomerase thermoactinomyces strains and immobilize glucose isomerase. Methods High-producing glucose isomerase thermoactinomyces strains were obtained by the isolation, screening and mutation breeding. Ion exchange resins were served as a supporter for the immobilization of glucose isomerase. Results High-producing glucose isomerase thermoactinomyces strains were selected. The glucose isomerase was immobilized with ion exchange resins and the activity of immobilized glucose isomerase was 18 000～20 000U/g(dry). Conclusion The activity of glucose isomerase obtained is higher. Key words: glucose isomerase; immobilization; ion exchange resin 葡糖异构酶是水溶性酶[1,2]，通过物理、化学的方法把这种酶固定在不溶性的固体载体上，使酶可长期多次使用，实现工业生产的连续化、自动化，并可避免不利副产品的发生，使产品更易精制，从而提高产品质量，降低生产成本[3]。因此，固定化葡糖异构酶具有很好的应用前景[4]。 1材料与培养基 1.1材料 葡糖异构酶生产菌株（本研究室从采集的土壤样品中分离得到）；树脂（自选） 1.2培养基及培养条件 使用无机盐、淀粉及琼脂作斜面培养基，在45～50 ℃，相对湿度75%～80%条件下培养3～4 d。 发酵培养基组成：麸皮4%，豆饼粉1%，MgSO4 0.1%，K2HPO4 0.1%，CoCl3 0.01%，pH6.7，115℃灭菌30 min后使用。发酵温度为(41±1)℃，发酵时间60～65 h。发酵结束后经板框过滤得含酶发酵液，供固定化酶使用。 2方法 2.1菌种的筛选 从全国14个省市共采集2 847份样品，对产葡糖异构酶嗜热放线菌进行分离。然后将分离到的多株菌株用5种培养基进行培养，筛选出最佳的培养基。采用紫外线诱变技术处理培养的孢子，筛选最好的菌种。 2.2菌种的稳定性和安全性实验 经过较长时间的保存后，观察菌株的性能和酶活性的变化情况。过滤后的发酵液送山东省药品检验所进行抗菌性检验。 2.3固定化酶载体的选择 由于离子交换树脂具有较强的吸附力和一定的离子交换能力，易于再生和反复使用，因此我们采用树脂作为酶固定化的载体[5]。对载体处理后