补肾复方对压力负荷增加大鼠心肌纤维化影响.docVIP

补肾复方对压力负荷增加大鼠心肌纤维化影响摘 要:目的:观察补肾复方逆转压力负荷增加大鼠心肌纤维化的作用。方法:采用腹主动脉狭窄所致压力负荷增加大鼠左室重构模型,将雄性SD大鼠60只随机分为假手术组、模型组、卡托普利组、补肾复方大剂量组、补肾复方小剂量组,观察用药4周后左室心肌病理形态胶原染色、左室心肌间质超微结构、左室心肌Ⅰ型胶原免疫组织化学染色、左室心肌Ⅲ型胶原免疫组织化学染色等指标的改变。结果:模型组Ⅰ型胶原的平均光密度与假手术组比显著升高(P 1.3 分组处理? 随机分为5组,所有动物均常规喂养。假手术组(12只):手术时只分离腹主动脉,不用银夹缩窄,手术4周后,双蒸水灌胃1.5mL/100g体重,1次/日,连续4周。模型组(12只):造模4周后,双蒸水灌胃1.5mL/100g体重,1次/日,连续4周。卡托普利组(12只):造模4周后,卡托普利灌胃100mg/kg(相当于成人80～160倍),1次/日,双蒸水稀释,连续4周。补肾复方大剂量组(12只):造模4周后,补肾复方口服液(生药含量24g/kg体重,相当于成人16倍),1次/日,灌胃,连续4周。补肾复方小剂量组(12只):造模4周后,补肾复方口服液(生药含量12g/kg体重,相当于成人8倍),1次/日,灌胃,连续4周。 1.4 观察指标 1.4.1 左室重量指数(LVMI) 迅速取出心脏,沿房室交界处去除左右心房及大血管,去除右心室游离壁,将左心室加室间隔用JA1003型电子天平准确称重(上海精科天平厂生产的)作为LVM,并计算按照左室重量(mg)/体重(g)公式即左室重量指数(‰)作为左室肥厚的指标。 1.4.2 左室心肌病理形态胶原染色 试剂配制:Ponceau’s染色液400mL(0.5% Ponceau’s水溶液40mL,苦味酸饱和水溶液360mL);Victoria blue’B染色液400mL(Victoria blue’B2.0g,70%乙醇400mL)。染色方法:组织切片脱蜡至水;70%乙醇稍洗后,入Victoria blue’B染色液中15min;95%乙醇中分化数秒钟;用蒸馏水洗2次;用Ponceau’s染色液滴染2min;直接用无水乙醇分化与脱水;二甲苯透明;中性树胶封固。观察方法:在光镜下观察[3]。 1.4.3 左室心肌间质超微结构 将大鼠迅速处死后,取左室心肌固定于pH7.4二甲砷酸钠配置的2%戊二醛溶液内,经取材心肌缓冲液冲洗后再固定于10%锇酸溶液中,按电镜常规技术脱水、包埋,用LKB Ⅴ型超薄切片机作超薄切片,经醋酸钠与枸橼酸铅双重染色,在日本电子1200EX透射电镜下观察并照像,并重点观察心肌细胞间胶原纤维的改变。 1.4.4 左室心肌Ⅰ型胶原免疫组织化学染色及图像分析 石蜡切片,片厚5μm;二甲苯脱蜡;经各级酒精至水;0.2%胃蛋白酶溶液37℃1h;双蒸水洗涤5min×3次;0.6%过氧化氢―甲醇溶液37℃ 30min;双蒸水洗涤5min×3次;PBS洗涤5min×3次;加正常血清室温下20min;加第一抗体(1:100Ⅰ型胶原抗体)37℃1小时,4℃过夜;PBS洗涤5min×3次;滴加即用型envision置37℃烘箱40min;PBS洗涤5min×3次;加DAB溶液光镜观察下显色;水洗;0.5%甲基绿染色;用蒸馏水洗3次;37℃烘干,二甲苯透明;封片[4]。用石家庄华行医疗器械厂与河北医科大学联合生产的ZL2000细胞分析仪进行图象分析。 1.4.5 左室心肌Ⅲ型胶原免疫组织化学染色及图像分析 除第一抗体为1:100Ⅲ型胶原抗体外,余同Ⅰ型胶原。 1.5 统计分析? 用SPSS 11.5统计软件进行统计处理,定量资料以均数±标准差(±s)表示。实验组和对照组之间比较采用两独立样本t检验,以P≤0.05表示差别有统计学意义。 2 结果 2.1 一般情况? 共有16只死亡,死后均有尸体解剖。假手术组1只因肠梗阻死于术后第4天;模型组中有3只死于术后2天之内,经证实均死于急性心功能衰竭;卡托普利组2只死于术后3天肠梗阻,2只死于术后2周后慢性心功能衰竭。补肾复方大剂量组、补肾复方小剂量组均有4只死于术后2天之内,经证实系死于急性心功能衰竭与术后肠梗阻。 2.2 左室重量指数(LVMI)? 压力负荷增加大鼠各组左室重量指数的改变见表1,图1。模型组LVMI(‰)明显高于假手术组(P 如:丹参对人胚肺成纤维细胞(HLF)3HTdR和3H-Pro掺入有显著的抑制作用,并与浓度和时间有依赖性[7];还可以显著降低自发性高血压大鼠心肌Ⅰ和Ⅲ型胶原的含量,提示丹参具有预防和逆转心脏纤维化作用,其机制可能与其增加心脏局