解毒祛瘀滋阴中药对MRL-lpr小鼠中糖皮质激素受体α影响.docVIP

解毒祛瘀滋阴中药对MRL/lpr小鼠中糖皮质激素受体α影响摘 要:目的:观察解毒祛瘀滋阴中药对MRL/lpr小鼠脾及肾组织糖皮质激素受体α(glucocorticoid receptor, GRα)蛋白表达的影响。 方法:40只MRL/lpr小鼠随机分为模型组、西药组、中药组及中西药给合组,西药组强的松混悬液灌胃,中药组解毒祛瘀滋阴浓缩液灌胃。每组10只,另选10只清洁级正常小鼠为空白对照。采用Western blot及流式细胞术分别检测各组小鼠肾GRα蛋白表达及脾淋巴细胞GRα的蛋白表达和结合力变化。结果:肾组织GRα蛋白表达和脾脏GRα蛋白表达与结合力模型组比正常组显著降低(P0.05);中药组及中西药组与模型组相比较GRα蛋白表达均明显升高(P0.05)。 2.2 各组小鼠脾细胞GRα蛋白表达及结合力的比较 见表1。方差分析结果显示,中药组及中西药组与模型组相比,GRα结合力与GRα蛋白表达显著升高(P0.05),低于正常组,但无显著差异(P0.05);西药组GRα结合力与GRα蛋白表达与比模型组降低,但无明显差异(P0.05)。 3 讨 论 糖皮质激素(GC)由于其强大的抗炎、抗过敏和免疫抑制作用,在治疗自身免疫病方面得以广泛应用。但激素的大量使用也带来了许多副作用,临床表现主要有亢奋、焦躁不安、潮热、盗汗等肾上腺皮质功能亢进等症状,在中医辩证为肾阴虚证;撤停激素的使用又发生肾阳虚证。因此如何克服激素使用带来的副作用是医生及科学家们一直关注并努力的课题。 GC在体内通过与其受体(GRα)结合而发挥作用,其作用机制主要有①通过GRα与糖皮质激素反应元件(GREs)结合,直接诱导基因表达;②通过GRα与其它转录因子互作间接诱导基因表达;③GR介导第二信使的级联效应,即非基因组效应。GR的另一主要亚型GRβ无激素结合活性,可能与激素的耐药性有关[6-8]。 李久宏等[9]发现SLE患者外周血淋巴细胞GRα显著降低,但其血清中GC与对照相比并无明显差异。对SLE患者激素治疗前后外周血单个核细胞(PBMCs)GRα水平检测表明其蛋白水平治疗前高于治疗后,且与疾病活动性及激素剂量呈负相关[10]。李志军等[11]对SLE患者外周血白细胞GC/GR结合量进行检测发现其显著降低,并且结合量低的患者使用GC的疗效较差,副作用多见。提示激素治疗并不是通过提高体内GRα水平及结合力来达到治疗效果,本研究也发现强的松降低了MRL/lpr模型小鼠GRα蛋白的表达与结合力,此结果与GC下调GR的结论[12-14]一致。 近年来中药在自身免疫疾病治疗中的作用越来越受到重视,中药对GR的影响也有很多的研究。如杜娟等[15]观察到利用中药淫羊藿、熟地水煎剂能不同程度提高GRα下调模型大鼠GRα的蛋白表达和结合力。解毒祛瘀滋阴中药是范永升教授长期临床实践的结晶,经过多年的临床应用,发现其在治疗系统性红斑狼疮(SLE),撤减激素用量,减少激素毒副作用方面发挥了很好的效果。本研究以MRL/lpr模型小鼠为研究对象,采用Western blot及细胞流式技术,发现解毒祛瘀滋阴中药确实上调GRα蛋白表达和结合力,从而对下游靶基因发挥抑制转录或转录活化的作用。转录抑制是指配体激活的GRα单体通过蛋白-蛋白互作,抑制促炎症转录因子的转录调节作用,从而产生抗炎效应;转录活化是指配体激活的GRα以二聚体形式与靶基因启动子/增强子区域的糖皮质激素应答元件(glucocorticoid response elements, GREs)结合,诱导基因转录,这是目前认为糖皮质激素副作用的主要机制。解毒祛瘀滋阴中药能够减少激素的毒副作用,表明其在抑制下游的某些基因转录活化方面发挥了一定的作用,比如是否对GRα形成二聚体产生影响,这些还需要进一步实验进行研究探讨。 GRα分布于全身各组织器官,其与GC结合发挥了广泛而复杂的作用,它能诱导淋巴细胞的凋亡,而对某些细胞的凋亡又有抑制作用。这种活性的改变对机体产生多方面的影响,而其改变的原因是多方面的,如基因突变,转录异常、配体异常,GR结构变化等,有待进一步深入探讨。另外可以认为GC/GRα在不同组织器官中所作用的靶基因并不是完全相同的,如何寻找到这些靶基因并阐明它们与GC/GRα之间的功能互作将是一件非常有意义的事,它能帮忙我们揭示某些自身疾病是如何发生,揭示GC/GRα在调节细胞增殖、分化与凋亡方面的作用机制。在对SLE的研究中如果能找到相应的靶基因,也许能深刻揭示SLE的发生机制,而这种相应的靶基因也极可能成为SLE的特异性临床标识。 GRα水平及其结合力的检测已有多种方法。放射性核素标记的地塞米松结合实验和Western印迹杂交技术成熟完善,不过操作较繁琐,只适合实