紫外-可见分光光度分析的现状和展望.pptVIP

5.1 流动注射分析技术（FIA） 光度法与FIA结合的优点是试样和试剂用量少，样品的分解、溶液的稀释、转移、分离和富集均可由微机自动控制，且反应在密闭体系中进行，因而简化了操作，避免了玷污及手工操作所引起的人为误差，是准确度和精密度获得提高，一般的进样频率达到每小时数十次到数百次，更易实现自动化。 5.2液相色谱和毛细管电泳光度检测 光度法是包括离子色谱在内的液相色谱及毛细管电泳最常用的检测手段，它的灵敏度和选择性好，而且对湿度、冲洗剂组成的变化不敏感。 毛细管电泳法统指以高压电场为驱动力，以毛细管为分离通道，依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异实现分离的一种液相分离技术。 5.3 浊点萃取（CPE） CPE是近年来出现的一种新兴的液-液萃取技术，其以表面活性剂胶束水溶液的溶解性和浊点现象为基础，通过改变溶液pH值、离子强度、温度等参数引发相分离，将疏水性物质与亲水性物质分离，同时起到富集的作用。浊点萃取与紫外可见分光光度技术联用，不仅能富集待测元素，降低干扰元素对测定元素的干扰，而且能降低检出限。何微娜等将两者相结合，成功测定了维生素Ｂ12片中钴的含量，检出限(3s)为0.4998μg· L-1。 5.4 动力学光度法 解决在光化学反应、辐射化学反应和酶催化反应中，能量转化、酶的降解、生物合成等的反应变化。 特点：时间辨别、快速扫描、测定生物化学瞬间产物的吸收光谱和随时间变化值。 5.5 固相光度法 将有色络合物吸附或萃取在固相离子交换树脂上，再在固相上进行光度测定，往往是分离和富集同时完成，也可在HPLC和FIA中应用，利用导数技术降低或消除背景的影响。方法简单、快速、灵敏度高、选择性好，易于实现自动操作，特别适于环境水样等样品的分析。 结语 光度方法作为一种常用检测手段仍将会得到应用和发展。传统分光光度法与各种高效分离方法，如色谱、毛细管电泳的连用和与仿生学、化学计量学、动力学和流动分析的结合将是广度分析最具发展前景的研究方向，且将会在生命科学、环境科学、新材料科学及医药学的研究中继续发挥作用。 2 多组分体系的测定进展 在分光光度分析法中，对于吸收曲线严重重叠的多组分的测定，一般是将组分分离后逐个进行测定。近年来因计算数学的发展及计算机应用的普及而迅速发展起来的计算分光光度法，是一种不经分离同时测定多组分体系的快速、有效的方法。此类方法主要有：ＡＫＣ矩阵法、Ｈ－ｐｏｉｎｔ标准加入法、最小二乘法、小波变换法、ＣＰＡ 矩阵法、岭回归法、偏最小二乘（ＰＬＳ）法、卡尔曼（Ｋａｌｍａｎ）滤波法、人工神经网络（ＡＮＮ）法。 四、紫外可见分光光度计的最新应用 1.“褶合光谱” 法 “褶合光谱”法是我国第二军医大学的吴玉田教授发明的。此法测量样品时，不需要对试样经过分离,可以直接用紫外可见分光光度计分析含有6个不同组分的试样。 此法对于药物分析工作来讲, 是一个重大的突破,在新药开发、疾病诊断、食品科学、产品质控、环境毒性分析等领域有广阔的应用前景。 * * 1945年，紫外-可见光谱仪器问世。今天已经发展成为集光学、电学、机械和计算机等学科相结合的高科技产品。 * 吸收池主要有石英池和玻璃池两种。在紫外区须采用石英池，可见区一般用玻璃池。 * 紫外可见区的光源主要采用卤素钨灯、氘灯或氙灯。在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。可见光区：钨灯作为光源，其辐射波长范围在320～2500 nm。紫外区：氢、氘灯。发射185～400 nm的连续光谱。 * 狭缝：将单色器的散射光切割成单色光。直接关系到仪器的分辨率。狭缝越小，光的单色性越好。分为入射狭缝和出射狭缝。 * 凹面闪耀全息光栅 * 扫描光栅型分光光度计使用的探测器主要为光电管、光电二极管和光电倍增管等。近十几年来，随着阵列型光电器件技术的发展和应用，促使全新结构和性能的固定光栅型分光光度计的诞生，尤其使分光光度计的测量速度上了一个新的台阶。 另外，由于固定光栅型分光光度计没有机械运动部件，简化了结构，减小了体积，提高了工作的稳定性，使分光光度计能走出实验室，进入工作现场，进行在线测量。 * * 经单色器分光后的一束平行光，轮流通过参比溶液和样品溶液，以进行吸光度的测定。 * 经单色器分光后经反射镜分解为强度相等的两束光，一束通过参比池，一束通过样品池。光度计能自动比较两束光的强度，此比值即为试样的透射比，经对数变换将它转换成吸光度并作为波长的函数记录下来。 * 导数光谱指以吸光度的导数为纵坐标，波数为横坐标所记录的光谱图。于计算机技术的发展，导数光谱程序已被现代光谱分析仪器广为采用，既可提高