饲用大豆肽生产菌株的初步筛选及发酵条件研究.pdfVIP

兽药与饲料添加剂 2008年第13卷第，前 饲用大豆肽生产菌株的初步筛选 及发酵条件研究 陈宏军 (江苏畜牧兽医职业技术学院．江苏 泰州 225300) 摘 要 通过发酵试验对3株芽孢杆菌进行筛选，并确定该菌株的最佳接种量、种龄和摇床速度。对其发酵条 件进行优化，结果表明最适条件为：加水量94％、温度30 oC、180 r／rain旋转摇床48 h。发酵液的水解度达到15．9％． 比优化前提高了1．92倍。 关键词 大豆肽 菌株 水解度 发酵条件 中图分类号：816．7 文献标识码：A 文章编号：1007—9157(2008)01—0006—03 多年来，抗生素、激素、口一兴奋剂等药物添加剂 从冰箱中取出，转接活化，37 c(=培养24 h后接种到 的广泛使用，导致畜禽产品和水产品中药物残留严 种子培养基中，180 r／min旋转摇床，37 c【=培养 12 h 重，细菌耐药性增强，给人类带来很大威胁。大豆肽 作为种子液，种子液以5％的接种量再接种于液体 的出现为开发新型绿色饲料添加剂开辟了一个新 发酵培养基(加水量94％)，30 oC、180 r／min培养36 途径。大豆肽通常是平均肽链长度(PCL)为2～l0的 h。分别用感官评定法和三氯醋酸(TCA)沉淀法测定 短肽(以2～3的低分子肽为主)。目前，大豆肽主要 发酵液苦味值、TCA可溶性氮(后简称酸性可溶氮) 通过酶解法生产，由于酶价格昂贵，致使大豆肽市 含量和豆粕蛋白的水解度，据此选出多肽产率较 场价格居高不下，限制了其在畜牧业中的广泛应 高、苦味值较小的l株菌株。 用。用微生物发酵法制备大豆肽，将酶的生产和应 2．1．1 苦味的评定 用合二为一，不需添加额外的酶就可生产出大豆 评定小组由5人组成，评定人员用蒸馏水漱口 肽，较酶解法生产成本低。本试验旨在筛选出生产 之后，取待评定液置于口中，10 S后吐出：漱口后取 大豆肽的合适菌株，并研究其适宜的发酵条件。 与之苦味程度相近的标准液品尝，如确认两苦味相 1 试验材料 近，即可将待评定液的苦味值定为该标准液的苦味 1．1 菌株 值，否则需取其他标准液再尝，直至确定苦味值。结 枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌． 果取5人评定值的平均值。 由本校生物技术实验室保存。 以喹啉为基准物质配制标准液。称取喹啉0。l g l。2 主要仪器设备 溶于50 mL 5％乙醇溶液中，从中取4 mL溶液用蒸 超净工作台、恒温培养箱、控温摇床、台式离心 馏水稀释至 100 mL，得到8x10 g／mL喹啉溶液．再 机、722分光光度计等。 进一步稀释成4x10～、2x10～、lxl0一、5x10-6、2．5xl0-6 l-3 培养基 g／mL等质量浓度喹啉溶液。经评定当标准液质量浓 斜面培养基：营养肉汤琼脂；种子培养基：酵母 度为2．5x10 g／mL时，刚好无苦味．定此值C为下 浸粉0．5％、胰蛋白胨 l％、氯化钠l％、pH7。2；液体 限。32c为上限(此时若再增加喹啉浓度，苦味基本 发酵培养基：不同比例的豆粕粉溶液、自然pH值。 不再增加)。以此为标准对不同发酵液的上清液进 2 试验方法