HIF-1α反义寡核苷酸对宫颈癌Hela细胞生长抑制作用及HIF-1α、VEGF表达影响.pdf

HIF．1a反义脱氧寡核苷酸对宫颈癌Hela细胞生长的 抑制作用及HIF．1a、VEGF表达的影响 硕士研究生：于海华 指导教师：韩 璐 教授 专业名称：妇产科学 摘 要 背景：近年来，反义技术广泛地应用于肿瘤基因治疗的研究中，随着基因组 学、蛋白组学的研究，已筛选出部分在肿瘤转化、发展过程中的靶基因可作为治 疗的靶标。有学者发现，缺氧诱导因子．1a(HIF．1a)是介导肿瘤细胞缺氧适应 的关键性转录调控因子，在多种恶性实体瘤中高表达。HIF．1a可调节多种靶基因 的能量代谢，影响新血管的生成，促进肿瘤的增殖和转移。血管内皮生长因子 (VEGF)在内皮生长及肿瘤发生中具有重要作用，肿瘤的生长和扩散转移与血 管生成密切相关。因此，HIF．1a可能是肿瘤基因治疗中一个极具潜力的靶点。 目的：应用HIF—l Hela细胞，研究反义脱氧寡核苷酸封闭HIF一1Q基因对体外宫颈癌Hela细胞生长 d的妇 的抑制作用及对HIF．1d、VEGF表达的影响，力求为今后进行针对HIF．1 科肿瘤基因治疗探寻一条新的可行途径。 方法： n反义脱氧寡 1、对体外培养的宫颈癌Hela细胞进行转染。实验分为HIF一1 n正义脱氧寡核苷酸(SODN)组、脂质体对照组及空白 核苷酸(ASODN)组、HIF．1 对照组。 a 2、采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法，检测HIF一1 细胞株增殖的影响。 Q和VEGF的表达。 对照组细胞HIF．1 mRNA Q和VEGF 4、逆转录一聚合酶链反应(RT—PeR)检测各组细胞HIF—l 的表达。 了解HIF-la基因的沉默效果。 6、所得数据应用SPSSll．5统计分析软件进行分析。 结果： 抑制作用增强。 2、RT．PCR及Western blot结果显示， 因表达与SODN组、脂质体对照组及空白对照组比较，表达量明显降低，差异有 用提供了实验依据。 结论： 1、HIF．Ia在胞浆及胞核中均表达，而VEGF仅在胞浆中表达。 下调HIF．1o、VEGF基因表达的作用。 3、HIF．1ⅡASODN转染可以作为宫颈癌治疗的一种新思路。 关键词： 宫颈肿瘤缺氧诱导因子一1 反义脱氧寡核苷酸血管内皮生长因子 Hela细胞 InhibitionofHelacell andthe ofHIF-1n growth expression andVEGFantisense by oligOdexynucleOtide targeting induciblefactorla hypoxia gene Master candidate：Yu degree Haihua