不同流场对细胞粘附影响及粘附后VE-cadherin分布及表达变化.pdfVIP

附录……………………………………………………………………………40 1.主要英文缩略语索引…………………………………………………40 文献综述………………………………………………………………………41 成果目录………………………………………………………………………52 致谢……………………………………………………………………………53 3 不同流场对细胞粘附的影响及粘附后 VE-cadherin 表达与分布的变化 研究生：叶 旭 导 师：杨永宗教 授 专 业：病理学与病理生理学 中 文 摘 要 血流动力学在动脉粥样硬化发病机制中占有极为重要的地位，目前的研究结 果表明剪切力的变化通过影响血管内皮细胞的结构与功能状态而导致各种慢性 [1-3] 血管性疾病如动脉粥样硬化 ，特别是内皮细胞粘附特性的改变，因为单核细 胞与内皮细胞粘附是动脉粥样硬化早期核心事件。 本课题组前期实验在新西兰 兔颈总动脉套环复制出狭窄后动脉粥样硬化模型，证明动脉狭窄后局部血流动力 学发生改变特别是局部的紊流的出现与动脉粥样硬化的形成密切相关。为了进一 步探讨两者的关系，本实验首先建立了体外流体模型，成功的模拟出了生理层流 及致病紊流，并观察了不同流场对单核细胞与内皮细胞粘附的影响及细胞粘附后 内皮细胞中VE-cadherin 表达与分布变化。 第一部分 体外模拟三种流场 目的 运用流动腔(FLOWCHAMBER)在体外模拟三种流场。 方法 对传统流动腔中的硅胶膜进行改造，并通过调节流量大小从而形成不同流 场。用 FLUENT 软件对流场进行计算分析。 结果 在体外建立了低剪切力紊流、低剪切力层流、高剪切力层流。 结论 经 FLUENT 软件计算分析，结果表明三种流场的各项指标符合预期要求 能代表体内流场的特点。 4 第二部分 不同流场对细胞粘附的影响及粘附后内皮细胞中 VE-cadherin 表达及分布的变化 目的 探讨不同流场对 THP-1 单核细胞与 ECV304 内皮细胞粘附的影响及细胞粘 附后内皮细胞VE-cadherin 表达及分布的变化。 方法 不同的流场作用单层内皮细胞及单核细胞 6 小时，观察不同流场下单核细 胞与内皮细胞粘附;用 Western 蛋白印迹法检测 VE-cadherin 的表达，用 免疫细胞化学方法在激光共聚焦显微镜下观察 VE-cadherin 蛋白在内皮 细胞中的分布变化。 结果 不同的流场作用单层 ECV304 内皮细胞及THP-1 单核细胞 6 小时发现低剪 切力紊流下单核细胞粘附数高于低剪切力层流及高剪切力层流且在低剪 切力紊流组中有大量单核细胞成簇粘附于内皮细胞上; 单核细胞与内皮 细胞共育 0 小时，1 小时，2 小时，4 小时后, VE-cadherin 蛋白的表达量 在各组细胞间无差异;0 小时组 VE-cadherin 着色集中于内皮细胞周边即 细胞与细胞之间,1 小时 2 小时 4 小时 VE-cadherin 着色不再集中于细胞 周边而是分散到整个内皮细胞膜。 结论 低剪切力紊流环境下单核细胞与内皮细胞的粘附增加且形成了较多的成 簇粘附，细胞粘附后内皮细胞膜上VE-cadherin的分布随之改变。 关键词 剪切力 流场 粘附 单核细胞 内皮细胞 VE-cadherin 5 Effects of different flow field on cell mono