HuR+siRNA对子宫内膜癌细胞体外增殖和凋亡影响及其机制的研究.pdf

方法 用细胞免疫荧光方法测定HuR在子宫内膜癌Ishikawa细胞系中的表达、转 染前后的变化；用脂质体转染法将构建的HuRsiRNA表达质粒转染入子宫内膜癌 细胞中HuRmRNA、蛋白的表达及ER．0【蛋白表达情况；以及应用流式细胞技术 及MTT比色法分别检测转染后子宫内膜癌Ishikawa细胞周期、凋亡及增殖的变 化情况。 ●士 里 j日 禾 1、构建HuRsiRNAs并测序，测序结果与设计相符；将设计的三条HuR．siRNA 细胞中HuR HuR-siRNA2质粒用作后续转染实验。 2、HuR免疫荧光结果显示：HuR在Ishikawa细胞的胞核和胞浆中都有表达， 48h相比，HuR荧光强度明显 但主要表达于胞核中，转染前与转染HuR．siRNA2 减弱。 mRNA条带亮度相似，而转染HuR-siRNA2 3、RT-PCR实验中，各泳道中13-actin 表达质粒组条带亮度明显弱于空白对照组、脂质体对照组、HuR—siRNA-neg组条 24h、 mRNA的相对含量分别为：0．6082+0．01562、 48h、72h转染组细胞中HuR 意义(PO．05)。 HuR-siRNA224h、48h、72h转染组分别与以上三组相比均具有统计学意义 2 (F--746．595，P0．01)。HuR—siRNA2 48h、72h组与以上三个 质体对照组相比具有统计学意义(PO．05)。HuR．siRNA2 24h、48h、72h 在空白对照组、脂质体对照组、HuR．siRNA．neg组、HuR．siRNA2 0．5879士0．0277、0．5041士0．0072、0．41004．0．0140、0．22704．0．0189。HuR．siRNA2转 染24h与空白对照组、脂质体对照组、HuR．siRNA．neg组相比无统计学意义 相关分析说明两者之间存在明显正相关关系(F0．951，P=0．003)。 增值速度随着转染作用时间的延长明显降低，在转染72h增殖抑制最明显，抑制 率为34．26％，转染24h组与空白对照组比较差异无显著性(P0．05)；转染48h组、 72h组与空白对照组比较差异有非常显著性(P0．01)；转染96h组与空白对照组比 制率分别为15．31％、26．99％、34．26％、19．58％。 HuR．siRNA2组细胞凋亡比例分别为O．41％4-0．49％、5．09％4-1．58％。 结论 的同时，ER．0【蛋白表达也下降，两者具有明显相关性。HuR基因表达沉默后能抑 制子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖，促进其凋亡。HuR在子宫内膜癌细胞的发生和 发展中发挥重要的作用。 关键词 4 英文论著摘要 HuR silenceonthe and the gene proliferation Study linesIshikawa Carcinomacell ofEndometrial apotosis invitro． ective