纳米羟基磷灰石对成骨前体细胞增殖和分化影响以及胚胎干细胞成骨分化的研究.pdfVIP

致谢 不经历风雨哪知彩虹美丽，没有挫折困难便不会珍惜和回味．都说快乐的日子特别好 过，而痛苦的日子特别漫长．但读研的日子却那么长，又那么短．似乎总在盼着毕业的日子， 又似乎一眨鼹就到了该说再见的时候。迷茫，无奈的时候会回味曾有的青春和快乐，好像放 电影，一幕幕在眼前滑过，却突然意识到现在的生活也将变成一段回忆，原来那些无奈、彷 徨、痛苦的日子竟已成了最精彩的回忆，那些随时存在的快乐、温暖，更是那么难得和无法 复制。想想最初对生物科学的理解非常简单，只是在细胞世界的神秘黪驱使下才选择了进行 细胞生物学的研究，最终能够进入这个实验室里学习、研究，实在是非常幸运的。 在这里，我想首先感谢我的导师张铭教授。感谢他能接受我这个非生物专业的学生踏进 生物的门槛，去求知．探索；感谢他在我犯错时宽容、理解，却对我的科学研究非常严格， 正是他的严格要求让我不敢对自己放松要求，没有虚度读研的时光；同时感谢他在任何时候 都鼓励我要充满信心，不要放弃对科学的追求。 还要感谢赵小立老师，每次我有科学问题向他求教时，住都耐心解答，并且将他的文献 知识和研究经验毫无保留的与我交流，给我很多启发。感谢席咏梅老师，感谢她在我写文章 时悉心指导，同时给了我很大的支持。感谢唐睿康教授及其实验室提供的纳米羟基磷灰石实 验材料。感谢杜英老师，虽然与她相处的时间并不长，但还记得她对我们的关心和帮助。 感谢实验室朝夕相处的同学们，你们带给我太多的快乐。感谢刘玉侃，苏中渊，从实验 材辩到实验设计，你们都给我了缀多帮助，每当我遇到难题时。总是会去找你们商量；感谢 冯树梅、骆靖峰，和你们太熟悉了，才会有那么多争执，但所有那些开心的争执的片断我都 会珍藏的；感谢陈小攀、谭舟，感谢你督j在我实验过程中寄予的大力的、无私的帮助；感谢 黄华荣师兄，感谢吴蓉蓉，你们的知识以及科学能力让我佩服，感谢你们给我的启发、帮助， 也感谢你们对我实验的关心；感谢李颖、张佳蓉、纪慧娇．顾斌，感谢你们给予我的帮助， 感谢大家在一起的美好时光…… 最后，感谢我的家人，他们给了我太多的理解和支持，无法用言语表达．只能将这份感 动记在心里，谢谢你们1 2 摘要 骨组织工程是目前临床治疗骨缺损最有前途的方法之一，理想的组织工程 骨应具有来源广泛，可塑性强，体内相容性好和成骨能力强的特点。随着纳米 技术的发展，不断有新的纳米材料应用于组织工程，但对这些纳米材料的生物 学效应尚无足够的报道。而组织工程细胞来源有限是另一个重要的限制性因 素。本实验旨在研究新型的纳米材料对成骨细胞的影响以及胚胎干细胞成骨分 化的规律。 论文第一部分研究新型的20rim粒径的羟基磷灰石(nHAP)对成骨前体细 胞MC3T3-E1的生物学效应。采用纳米羟基磷灰石颗粒悬液直接作用于成骨前 析nHAP悬液对成骨前体细胞增殖和分化影响。探讨了钙离子溶出的培养液和 条件培养液吸附的nHAP对细胞增殖、分化的影响。结果显示：nHAP颗粒 对成骨前体细胞的增殖有抑制作用但可以促进细胞的碱性磷酸酶活性以及后 期的矿化，而钙离子溶出组和条件培养液吸附组并不存在明显影响。 论文第二部分研究了胚胎干细胞(ESCs)成骨分化。胚胎干细胞具有增 殖潜能，将其来源的成骨细胞做为组织工程供体细胞具有很好的应用前景。本 实验采用小鼠胚胎干细胞，通过单层法诱导，分化初期用维甲酸处理，随后采 用成骨诱导剂(维生素C、B一磷酸甘油、地塞米松)诱导。运用RT-PCR和 茜素红染色的方法进行鉴定。结果显示该方法提高了后期矿化结节的产量，其 中，维甲酸诱导了闻质细胞的产生。本实验以单层法诱导，结合维甲酸处理诱 导胚胎干细胞向成骨分化，为骨组织工程种子细胞的获得提供了一条新的途 径。 关键词： 纳米羟基磷灰石， MC3T3．El，胚胎干细胞， 成骨分化 3 Abstract ofthefirst isto theeffects ‰purpose study investigate of part