1种新型功能性杂交胰岛β细胞系的建立.pdfVIP

中国医科大学学报第42 卷第2 期 2013 年 2 月 .143. Joumal of China Merlical Universitv \oL42 No.2 Fph. 2D 13 ·技术方法· 1 种新型功能性杂交膜岛日细胞系的建立 李晓航，张佳林，李乐，康铁利，程颖，石莓，张域硕，赵宁，刘永锋 (中国医科大学附属第一医院普通外科教研室，肝胆外科暨器官移植科，沈阳 110001) 摘要 目的 通过应用基因转染及细胞融合技术构建永生化细胞，建立 1 种功能良好、无致瘤性、增殖可控的杂交月夷岛防细胞 系。方法 通过脂质体介导逆转录病毒载体SSR69 转染至原代成纤维细胞中，筛选稳定表达 SV40 LTag 的永生化细胞。提取大 鼠月夷岛，通过族蛋白略及 DNA 酶裂解成羊月夷岛细胞。对永生化成纤维细胞及羊个月夷岛 p 细胞进行电融合，通过有限稀释法获 得杂交月夷岛。细胞克隆叫比较杂文及正常自细胞内底岛素的含量及对葡萄糖刺激H夷岛素释放反应工通过 RT-PCR 及 Westem blot 分析杂交政岛。细胞中 SV40 LTag、 insulin 、葡萄糖激酶(GK)及葡萄糖转运休-2( Glut-2)基因的表达ρ 结果 建立的永生化 成纤维细胞系的增殖能力明显优于原代成纤维细胞 (p 0.05) 。成功获得杂交政岛日细胞克隆，其细胞呈短梭形或局圆形，且 具有贴壁生长等特性h 透射电子显微镜下可见细胞内政岛素分泌颗粒，杂交与正常月夷岛。细胞之间细胞内政岛素含量、月夷岛素 释放指数及 insulin 、 GK、 G1ut- 2 蛋白及mRNA 表达水平无统计学差异(P 0.05) ， 但 2 种细胞内 insuli队GK、 Glut- 2 的表达水平 显著高于 RIN-m5F 细胞(P 0.05) ，结论 可通过永生化成纤维细胞及羊个月夷岛日细胞电融合诱导生成杂交政岛日细胞，且 杂交细胞能够对葡萄糖的变化产生应答反应。 关键词 月亮岛移植;永生化;也融合;杂交换岛自细胞系 中图分类号 R318.15 文献标志码 B 文章编号 0258-4646(2013)02-0143-06 网络出版地址 lkcms/detail/21.1227.R1018.011.html Establishment of A Novel Functional Hybrid Islet ß Cell Line by Electrofusion U Xiao-hang ,ZHANG Jia-lin ,U 1元， KANG Tie-li ,CHENG Yi吨，SHI Rui ,ZHANG Cheng-shuo ,ZHAO Ni吨， UU Yong-feng (De阴由nent of He归tibiliary/Or军副 Transplantation ， Re辑出-ch 0伍ce of Geneml S山-geη，币1e First Hωpital ， China Medical UniVPrsity ,Shenyang 11αX)l ,China) Abs缸-act Objective To establish a functional ,non-tumorigenic ,expansion-controllable hybrid islet ß cell and to induce cell immortaliza- tion by gene transfection and cell fusion teclmology. Methodsηle primary fibroblast cells we陀 transfected with 出e retroviral vector SSR69 mediated by liposome , and the immortalized cells stably expressi