Hi5-SF悬浮细胞系的建立及鉴定.pdfVIP

"ë比，(t4l'号.， ð且 2017 ， 26(2):173-178 Acta Agriculturae Boreali-occidentalis Sinica doi: 10.7606/j.issn.1004-1389.2017 .02.003 网络出版日期:2016-12-29 网络出版地址:/kcms/ detai l/61. 1220. S. 1005.006. html Hi5-SF 悬浮细胞系的建立及鉴定 马 伟1 ，王家敏1 ，马桂兰2 ，马 祺2 ，马 花1 ，乔自林1 ，马忠仁3 ，冯玉萍3 (1.西北民族大学甘肃省动物细胞工程技术研究中心，兰州 730030; 2. 兰州百灵生物技术有限公司，兰州 730010; 3. 西北民族大学生物工程与技术国家民委重点实验室，兰州I 730030) 摘 要 从中国典型培养物保藏中心(CCTCC)引进 High Five 细胞并对其进行驯化，获得无血清悬浮驯化株 (Hi5-SF) 。依据《中华人民共和国药典(2010 年版三部门对其进行细胞生物学特性研究、微生物污染、病毒外 源因子及细胞致瘤性检测。结果发现，Hi5-SF 细胞复苏活力 76.3% ，生长曲线呈"S"型，最大增殖密度可达 1 3. 50X10' mL- ，群体倍增时间为 26.2 h; 细菌、真菌及支原体检查均为阴性;血细胞吸附试验、致细胞病变试 验和特异性病毒荧光抗体结合物检查结果均为阴性;致瘤性检查结果也为阴性。说明该细胞株符合兽用疫苗 生产用细胞质量要求，可以在疫苗研究与生产中应用。 关键词 High five 细胞F 悬浮培养;质量评价 中图分类号 S85 文献标志码 A 文章编号 1004-1389(2017)02-0173-06 培养基时，细胞仍需要 3~5 代的适应培养方可正 粉纹夜峨 (Trichoplusia ni) 卵巢细胞株 BTI-TN-5Bl-4 是 20 世纪 90 年代 Robert R 和李 常生长[吨。 High Five 细胞的高密度无血清悬浮 培养在疫苗研究和生产上具有重要意义。本研究 国勋等从粉纹夜峨卵巢细胞系 BTI-TN-5B1 克隆 利用兰州百灵生物技术有限公司开发的 得到的新型宿主细胞，Invitrogen 公司注册商标 BFLM502 SFM 培养基对引进的 High Five 细胞 为 High Five 细胞[叫。西北民族大学甘肃省动 CCCTCC 株〉进行无血清悬浮驯化，获得可无血 物细胞工程技术研究中心的 High Five 细胞引自 清悬浮生长的 Hi5-SF 细胞株，并对其进行细胞 中国典型培养物保藏中心CCCTCC) ，为淋巴母细 胞样形态，半贴壁生长，培养液为 Grace' s Insect 生物学特性研究和质量检测，以评价该悬浮细胞 MediumC含 <]'=10% 的 FBS) 0 High Five 细胞对 株用于动物疫苗研究和生产的可能性。 多种病毒敏感并能支持外源基因高效表达，尤其 1 材料与方法 具有较高的多角体病毒增殖能力和重组蛋白表达 1. 1 材料 水平，是当前应用昆虫杆状病毒表达载体系统 CBaculovirus expression vector system ,BEVS)生 High Five 细胞 (CCTCC) ;新生牛血清 产病毒样颗粒CVirus-like particles , VLPs) 疫苗 (NBS，兰州民海)、膜蛋白酶液CGibco) 及无