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细胞培养技术基础
细胞培养技术基础;第一个问题…;细胞培养基本概念 (一);细胞培养基本概念;细胞培养的应用;细胞培养操作安全;生物安全性等级;生物安全性等级与操作要求;细胞培养设备;无菌操作基础;清洁的细胞培养工作区;清洁的塑料或玻璃器皿;良好的个人卫生习惯和操作技巧;细胞培养基;细胞培养基 (续);细胞的获得;常用细胞库;细胞的获得;例:细胞株的说明书;例:细胞株说明书-ATCC;例:细胞株说明书(续1);例:细胞株说明书(续2);细胞的日常维护;贴壁细胞的传代;悬浮细胞的传代;活细胞计数;细胞冻存;选择生长状态良好的对数生长期细胞
进行活细胞计数,不要冻存死细胞比例达到20%的细胞
根据冻存细胞量准备冻存管,每个管一般装1ml液体,细胞量在5X106左右
准备好冻存液,一般冻存液包含10%DMSO+90%FCS,也可以是10%DMSO+20%FBS+基础培养基
用冻存液重悬细胞,轻柔的吹散细胞
每个冻存???装入1ml悬液,并放在冰上30min
将冻存管放入-80度冰箱24小时过夜
转移到液氮罐或超低温冰箱长期保持
;细胞复苏流程;发生细胞污染是件让人抓狂的事!!!;识别污染;细菌污染;真菌与酵母污染;污染的处理;常用抗生素;支原体污染;支原体污染;支原体污染是严重的世界性问题;支原体污染的检测和处理;细胞的交叉污染;其他较罕见污染;Thank you for your attention!
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