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VEGF基因表达转录调控机制探究进展【摘要】VEGF在促进血管生成方面起重要作用,废用其中一个等位基因就会导致胚胎致死。在很多生理和病理状态下,VEGF基因的表达会变化以适应诸如缺氧、炎症刺激或随肿瘤的生长而上调。这种调节主要集中在三个方面:转录调节、mRNA稳定性的调节(目前认为主要集中在3’UTR)、翻译起始的调节(目前认为主要集中在5’UTR)。本文主要从各个转录因子的角度探讨转录水平的调节,并着重讨论目前研究相对清晰的HIF-1、AP-1和SP-1/SP-3的作用,而并不谈及VEGFmRNA稳定性和翻译方面的内容。? 【关键词】VEGF;基因表达调控;转录;转录因子? doi:10.3969/j.issn.1006-1959.2010.09.428文章编号:1006-1959(2010)-09-2648-01 VEGF基因是由8个外显子,7个内含子构成。编码区大约14kb。人VEGF基因定位于6p21.3。VEGF的核心启动子并不包含典型的翻译起始序列,如TATA盒,目前认为VEGF的转录起始点位于SP1结合位点下游50个bp。VEGF基因在很多种系中都存在,不同的种属的启动子包含大量同源序列:SP1/SP3、AP-2、AP-1、Egr-1、STAT-3、HIF-1。启动子包含许多保守的结合位点以结合各种各样的转录因子。? 1.HIF-1? 在VEGF启动子的5’UTR-985～-939位上有缺氧应答元件HRE,HIF-1与HRE结合后会显著地上调VEGF的转录水平。而HIF-1是一种异二聚体,由HIF-1α和HIF-1β结合而成。其中HIF-1α是一个具有碱性H-L-H结构的蛋白质,在常氧状态下,它的第462和第564位脯氨酸会被羟化。??[1]?VHL(一种抑癌基因的表达产物)属于E3-泛素链接酶的一部分,能靶向降解羟化的HIF-1α,而羟化对于泛素链接酶与VHL的连接是必不可少的,并且这种羟化在缺氧状态下是十分微弱的,这也是缺氧上调VEGF转录的重要原因之一。Clifford SC等也研究证实HIF-1在VHL缺乏的肾癌细胞株中组成性地激活,说明了VHL对HIF-1的抑制作用。??[10]?? 在CCL39-Raf-1:ER细胞缺氧条件下培养,用Ras的过表达以激活Ras-Raf-MAPK/MKK(ERK1/ERK2)途径,发现在104kDa区域(磷酸化的HIF-1α)出现一独立带,而且是与p42/p44MAPK的活性成正相关。用MKK1抑制剂PD98039抑制这种途径后104kDa带就会消失。??[2]?相似的证据在不同种类的细胞系中也得到验证。??[3]?? Janusz Rak等使用了PI3K-AKT通路下游靶物质HDM2、P70S6K1的抑制剂LY294002后却没有任何效果,并且他们说明PI3K通路并不影响HIF-1的表达。??[3]?而Arsham等做出的结论却是Akt能上调成胶质细胞瘤中HIF-1α的水平但在肝细胞中却做不到。甚至Shafee等人研究发现在MCH603细胞中激活的Akt却下调HIF-1α的表达。??[4]?? B.H.Jiang等研究指出PI3K-AKT-HDM2/P70S6K1通路是通过mTOR以上调HIF-1α的水平(B.H.Jiang et al,2001)。在鼠3T3细胞中,HER2/neu信号的过表达和人MCF-7乳腺癌细胞中heregulin的刺激会导致HIF-1α的上调,并且这是依赖于PI3K、Akt和下游的FRAP(FKBP12-rapamycin相关蛋白,也称mTOR)。与其他诱导物相比,heregulin的刺激并不影响HIF-1的半衰期,却刺激mTOR的合成。??[5]?? 2.AP-1? AP-1是leucine zipper家族的转录因子,是由jun/jun或jun/fos-2组成的二聚体。而且,jun N末端激酶(JNK)对于jun的磷酸化和/或FRK/MAPK对fos的磷酸化对于AP-1的转录活性是至关重要的。AP-1作用位点TRE位于VEGF启动子上-1168/-1015位。? 在BAEC、HepG2、Hela细胞中,缺氧会显著上调c-jun和AP-1的转录活性,AP-1可以被JNK通路所激活,而且AP-1的激活也参与c-jun启动子的调控,以增强c-jun的表达,并对AP-1的激活正反馈。? E.Minet在HepG2细胞中使用EMSA技术,证实缺氧下MEKK1-JNK会被激活,从而上调c-jun以诱导VEGF转录。??[6]3.SP-1? SP-1蛋白是一个参与极其广泛的转录因子,属于一个多基因家族,其中包括SP2、SP3、SP4、XKLTS、TIEGS。SP-1精细地调控