自组装纳米簇模拟过氧化物酶%3a光谱学及电化学分析研究.pdfVIP

摘要 模拟酶是人工合成或经过人工修饰的用来模拟酶的结构、特性、作用原理以及酶在 生物体内的化学反应过程的超分子结构。与天然酶相比，模拟酶结构简单、效率高、选 择性好、化学性质稳定、反应条件范围广、价廉易得等优点。因此，模拟酶技术无论是 在生物学、分析化学等研究领域中还是将来在工业实际应用中都具有重大意义。 自组装纳米簇过氧化物模拟酶(artificial 二色谱法、紫外可见光等光谱学方法及直接电化学方法，研究模拟酶的结构、生物化学 特性、光谱学酶促动力学参数测量以及模拟酶直接电化学特性、机制、电化学酶促动力 学参数测量等。 实验选用浓度为0．19mmol／L的Cytc为模拟酶的“活性中心，5％的NF溶液为模拟酶 概为40nm左右的链球状纳米簇模拟酶结构。利用紫外分光光度计以H：0：为酶底物，愈创 析得出：当模拟酶在pH 7．O 7．O的 的Na：HPo{一NaH：P0,缓冲溶液中时模拟酶酶活性稳定性最高，所以本实验选用pH 性环境中抵抗底物自杀性失活能力最弱，但酶反应速度最快，在酸性环境中，模拟酶结 构稳定性高，对高浓度H：0：抵抗能力强。分析外界因素对模拟酶酶活性的影响，实验选 用氨基酸、阴离子表面活性剂十二烷基磺酸钠(SDS)及离子浓度对模拟酶酶活性影响 的测试。当在模拟酶酶溶液中加入三种氨基酸一组氨酸、赖氨酸、色氨酸(L．His、L．Lys、 L．Cys)后，三种氨基酸对模拟酶酶活性均具有影响，在不同酸度条件下，影响各不相 同；在模拟酶溶液中加入SDS后，模拟酶酶活性随SDS浓度的增加而逐渐降低；在不同 pH条件下，随着缓冲液离子浓度的增加对模拟酶酶活性影响各不相同。该模拟酶不仅具 有很好的稳定性，而且对过氧化氢(H202)底物也有很好的响应和高催化效率，利用紫 5一， 的40％左右。 利用电化学方法实现了模拟酶的直接电化学测试，成功将NF．Cytc模拟酶与纳米复 膜连接并修饰于玻碳电极表面，制备第三代酶生物传感器，运用电化学循环伏安法分析 模拟酶电化学反应机制为固化机制，并且电子迁移速度常数Ks为0．65s一。模拟酶生物 0．05nmol／L，电化学表征米氏常数l(ffl啪为2．3×10叫omol／L。 由实验数据我们得出以下结论：l、成功设计自组装纳米簇模拟过氧化物酶；2、该 c．NF模拟酶可代替天然过氧 模拟酶对H202底物具有很好的响应和高催化效率；3、Cyt 化物酶构建第三代生物传感器。 关键词：自组装，纳米簇，模拟酶，细胞色素C，光谱学，直接电化学 n ABSTRACT the artificial whichwasusedtosimulate Thesimulatedis or enzymesynthetic polymer thenatural andthe structure，characteristics，functional enzyme’S principle inthe tothenatural simulated havethe processorganism．Comparedenzymes，the enzymes chemical recognizecharacteristics，catalyseefficie