皮肤角质层粘贴技术及其应用.docVIP

皮肤角质层粘贴技术及其应用角质层在表皮的最表层，由多层扁平的角质细胞组成。这些细胞是已经完全角化的细胞，核和细胞器都已消失。在HE染色切片上呈均质伊红色，细胞轮廓不清，最表面的细胞连接松散，趋向脱落，即称为鳞屑。角质层粘贴技术，是用涂有粘性材料的胶带、圆盘或者玻片粘贴皮肤，作用于表皮角质层的粘附力可使鳞屑脱落，从而观察角质层的生理和病理学变化，此技术被广泛用于药物、化妆品的动力学研究和观察活性物质的渗透深度[1]。本文对常用的几种角质层粘贴材料、粘贴技术、临床应用等作一综述。 1 角质层粘贴材料 1.1 D-SquameR粘贴盘：D-SquameR(Cuderm Corp, Dllas, TX, U.S.A.) 粘贴盘，由透明聚酯薄膜构成的小圆盘，上面覆盖压力敏感粘合剂。在一定压力（10～25kPa或100～250g/cm2）下将D-SquameR盘粘在皮肤测试部位并持续一定的时间（5、10、30s），移去D-SquameR盘，一些鳞屑粘附在上面。胶带粘取角质层数量的多少受多种因素的影响，例如胶带粘贴的方式、次数、粘贴施加的压力、时间、皮肤的含水量、皮肤角质层细胞之间的内聚力、不同的身体部位和个体差异[2-4]。 1.2 CorneofixR ：CorneofixR（Courage+Khazaka GmbH, Cologne, Germany）一种透明聚酯薄膜胶带，胶带的一侧有个延伸出来的手柄，方便操作者持捏，而不污染粘贴鳞屑的待测部位。胶带可以根据测试部位的面积剪取不同的大小，准备测试部位后把胶带的粘着面与皮肤接触，用手指轻轻滚动按压胶带，并停留5s、10s、30s，以均匀的速度撕去胶带，一些鳞屑粘附在上面。该方法容易受到外界物质，如头发、灰尘等影响，因此采集到的贴片应立即分析或者保存完整再分析。 1.3 其他：BlendermR(3M Deutschland GmbH, Neuss, Germany)，是一种外科常用的透明胶带，透过胶带可观察伤口的变化，并且不受手指和手部的运动限制，它适用于持续很长一段时间。还有学者用TransporeR(3M, St. Paul, MN,USA,batch no.2002-12 AP)和MicroporeR(3M,St.Paul, MN,USA,batch no.2001-08 AN.)等胶带进行研究[2,5]。 2 胶带粘贴角质层分析技术 2.1 视觉评估：根据胶带粘附的鳞屑密度对照标准评估背景卡作视觉评估，此方法简单、快捷，但只适合通常的主观评分，不能用来测量实际的脱落量，也不能衡量粘附鳞屑的分布情况[6]。 2.2 定量分析法：根据胶带粘附的鳞屑计算其面积，也可以通过光反射来定量反映鳞屑的量。有研究者利用计算机分析D-SquameR粘贴盘所捕捉的鳞屑的图像视频，并用三个参数来描述，分别为SURFP（粘贴盘的黏附面积）、SMOD（平均光反射）、HI（异质性指数，即鳞屑平均密度）[7]。此种利用计算机分析D-SquameR粘贴盘上鳞屑参数的技术弥补了临床肉眼视觉评估的不足，并能够很敏感地反映皮肤鳞屑的变化及皮肤含水量的变化。CorneofixR胶带所粘取的鳞屑，利用VisioscanR（VC98,C-K electronics, Koln, Germany）采集、分析，并得出相关鳞屑参数，然后结合SELS（Courage+Khazaka GmbH, Cologne, Germany）系统自动化分析视频图像。CorneofixR参数包括：PA（完全覆盖于正常角质层细胞的面积百分比）、AI（每平方毫米所完全覆盖的正常角质层细胞）、DI（脱屑指数，根据不同角质形成细胞的分布来计算）[8]。 2.3 光学立体成像技术分析法：有学者研制出一种新型的成像装置（Corneosizer）无创观察、分析皮肤角质形成细胞的特征[9]。该装置利用落射荧光显微镜技术，原理是卤钨灯产生的光线在485nm过滤后通过分光镜聚焦在带有10倍物镜成像光纤束的近端，荧光再被同一成像光纤束收集后，通过上述分光镜再在503nm过滤。带有计算机支持的多组线性电荷耦合器件（charge coupled device, CCD）感应器的相机可在数秒内获取荧光图像。该技术安全、无创、使用简单，能在大多数皮肤表面应用，研究者能较容易操作软件并选择目的皮肤区域，能更加清楚观察不带毛发的皮肤区域的角质形成细胞（如唇红部位），并能快速成像测定角质形成细胞的大小。 2.4角质层细胞的分离与保存：将撕下的胶带用胶带切割机切割成1cm2的大小。1cm2的胶带放入1.5ml聚丙烯的管中，加入1.5ml的二甲苯溶液。10min后，用镊子把胶带从管中除去，在3000rpm的离心机中离心5min，