重组变异链球菌表面蛋白可溶性表达和抗体制备.docVIP

重组变异链球菌表面蛋白可溶性表达和抗体制备[摘要] 目的 探讨重组变异链球菌表面蛋白（rPAc）在大肠杆菌中可溶性表达的最佳诱导条件并制备其多克隆抗体。方法 通过改变pET20b（+）-AP/BL21（DE3）plysS工程菌的培养条件，提高rPAc可溶性表达水平。用纯化的rPAc免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体，通过酶联免疫吸附测定（ELISA）和Western blot法鉴定抗体的免疫学活性。结果 pET20b（+）-AP/BL21（DE3）plysS工程菌在Luria-Bertani（LB）培养基（pH值为7.2）上培养，至表示菌体密度的光密度值OD600 nm=0.6时加入1.0 mmol·L-1异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG），30 ℃诱导培养4 h，rPAc的可溶性表达量 最高。以纯化的rPAc免疫BALB/c小鼠，制备抗rPAc多克隆抗体，ELISA法测定抗体效价为1∶6 000，Western blot法鉴定出该抗体可特异性识别rPAc。结论 rPAc高效可溶性表达和抗rPAc多克隆抗体的制备为DNA初次免疫—蛋白质加强免疫策略的深入研究奠定了必要的物质基础。 [关键词] 变异链球菌表面蛋白； 原核表达； 抗体制备 [中图分类号] R 781 [文献标志码] A [doi] 10.3969/j.issn.1000-1182.2012.03.